| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-18页 |
| 第一章 疱疹病毒gN基因及其编码蛋白的研究进展 | 第13-18页 |
| 1 引言 | 第13-14页 |
| 2 疱疹病毒gN基因及其编码蛋白的特点 | 第14-15页 |
| ·疱疹病毒gN基因的特点 | 第14页 |
| ·疱疹病毒gN蛋白的特点 | 第14-15页 |
| 3 疱疹病毒gN蛋白的功能 | 第15-17页 |
| ·在抗原呈递过程中的病毒免疫逃避作用 | 第15页 |
| ·与gM蛋白作用发挥重要功能 | 第15-17页 |
| ·糖蛋白复合物gM/gN的形成方式 | 第15-16页 |
| ·在蛋白成熟过程中与gM蛋白相互影响 | 第16页 |
| ·在病毒的复制、感染和细胞间感染中的作用 | 第16-17页 |
| ·糖蛋白复合物gM/gN抑制细胞融合 | 第17页 |
| 4 选题目的和意义 | 第17-18页 |
| 第二部分 试验研究 | 第18-80页 |
| 第二章 鸭肠炎病毒gN基因的克隆及其分子特征分析 | 第18-38页 |
| 1 材料 | 第18-20页 |
| ·基因文库/菌株/毒株/载体 | 第18页 |
| ·实验动物 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·主要生物信息学分析软件 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| 2 试验方法 | 第20-23页 |
| ·DEV gN基因的扩增 | 第20-21页 |
| ·鸭胚成纤维细胞的制备 | 第20页 |
| ·接种DEV | 第20页 |
| ·DEV DNA的提取 | 第20页 |
| ·引物的设计与合成 | 第20-21页 |
| ·DEV gN基因的PCR扩增 | 第21页 |
| ·DEV gN基因的T克隆 | 第21-22页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第21页 |
| ·制备感受态细胞DH5α | 第21页 |
| ·连接 | 第21-22页 |
| ·重组T克隆质粒转化感受态细胞DH5α | 第22页 |
| ·重组T克隆质粒的鉴定 | 第22-23页 |
| ·重组T克隆质粒的酶切鉴定 | 第22-23页 |
| ·重组T克隆质粒的PCR鉴定 | 第23页 |
| ·DEV gN基因的生物信息学分析 | 第23页 |
| ·DEV gN基因序列的分子特性分析 | 第23页 |
| ·DEV gN蛋白序列的分子特性分析 | 第23页 |
| 3 结果 | 第23-35页 |
| ·DEV gN基因的扩增 | 第23-24页 |
| ·DEV gN基因的T克隆质粒鉴定 | 第24-25页 |
| ·DEV gN基因的分子特征分析 | 第25-26页 |
| ·DEV gN蛋白的分子特征分析 | 第26-33页 |
| ·DEV gN蛋白的理化性质分析 | 第26-27页 |
| ·DEV gN蛋白的保守结构域预测 | 第27页 |
| ·DEV gN蛋白的信号肽及跨膜区的预测 | 第27-29页 |
| ·DEV gN蛋白的翻译后修饰位点的预测 | 第29-30页 |
| ·DEV gN蛋白的抗原性分析 | 第30-31页 |
| ·DEV gN蛋白的二级结构及三级结构的预测 | 第31-32页 |
| ·DEV gN蛋白的亚细胞定位预测 | 第32页 |
| ·DEV gN蛋白的相似性及系统进化分析 | 第32-33页 |
| ·DEV gN基因的密码子偏嗜性分析 | 第33-35页 |
| 4 讨论 | 第35-38页 |
| ·关于DEV gN基因的引物设计及T克隆 | 第35-36页 |
| ·DEV gN基因及其编码蛋白的分子特征分析 | 第36-37页 |
| ·DEV gN基因的密码子偏嗜性分析 | 第37-38页 |
| 第三章 鸭肠炎病毒gY基因在DEF中转录时相的研究 | 第38-52页 |
| 1 材料与仪器 | 第38-39页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| 2 方法 | 第39-42页 |
| ·DEF的制备 | 第39页 |
| ·接种DEV | 第39页 |
| ·RNA的提取及测定 | 第39-40页 |
| ·Real-time qRT-PCR检测DEV gN基因的转录时相 | 第40-42页 |
| ·样品cDNA的获得 | 第40页 |
| ·引物设计与合成 | 第40-41页 |
| ·引物特异性检测 | 第41页 |
| ·标准品的制备 | 第41页 |
| ·标准曲线的制作 | 第41页 |
| ·Real-time qRT-PCR反应 | 第41-42页 |
| ·数据统计分析 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-48页 |
| ·引物特异性检测 | 第42-43页 |
| ·RNA完整性及纯度检测分析 | 第43-44页 |
| ·Real-time qRT-PCR标准曲线建立 | 第44-48页 |
| ·DEV gN基因在DEF中的定量检测 | 第48页 |
| ·数据处理 | 第48页 |
| 4 讨论 | 第48-52页 |
| ·转录时相的研究方法 | 第48-50页 |
| ·标准曲线分析 | 第50-51页 |
| ·DEV gN基因的转录时相分析 | 第51-52页 |
| 第四章 鸭肠炎病毒gN蛋白在DEF中的细胞定位分析 | 第52-61页 |
| 1 材料 | 第52-53页 |
| ·毒株/质粒/试验动物 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·主要仪器 | 第52-53页 |
| 2 方法 | 第53-56页 |
| ·重组真核表达质粒的构建路线图 | 第53页 |
| ·重组真核表达质粒的构建 | 第53-55页 |
| ·引物设计与合成 | 第53-54页 |
| ·DEV gN基因片段和真核表达载体的酶切处理 | 第54页 |
| ·制备感受态细胞DH5α | 第54页 |
| ·连接 | 第54-55页 |
| ·重组真核表达质粒转化感受态细胞DH5α | 第55页 |
| ·重组真核表达质粒的鉴定 | 第55页 |
| ·重组真核表达质粒的酶切鉴定 | 第55页 |
| ·重组真核表达质粒的PCR鉴定 | 第55页 |
| ·DEF的制备 | 第55-56页 |
| ·转染试剂制备 | 第56页 |
| ·重组真核表达质粒转染DEF | 第56页 |
| ·荧光信号检测 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-59页 |
| ·重组表达质粒pEGFP-C1/gN的鉴定 | 第56-57页 |
| ·DEV gN蛋白的细胞定位 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| ·蛋白定位的研究方法 | 第59页 |
| ·DEV gN蛋白的细胞定位分析 | 第59-61页 |
| 第五章 鸭肠炎病毒gN蛋白与gM蛋白的共定位分析 | 第61-73页 |
| 1 材料 | 第61-62页 |
| ·毒株/质粒/试验动物 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61页 |
| ·主要仪器 | 第61-62页 |
| 2 方法 | 第62-67页 |
| ·DEV gM基因的扩增 | 第62页 |
| ·引物设计与合成 | 第62页 |
| ·DEV gM基因的PCR扩增 | 第62页 |
| ·重组表达质粒pDsRed1-N1/gM的构建路线图 | 第62-63页 |
| ·DEV gM基因的重组表达质粒的构建 | 第63-65页 |
| ·制备感受态细胞DH5α | 第63页 |
| ·DEV gM基因片段和真核表达载体的酶切处理 | 第63-64页 |
| ·连接 | 第64页 |
| ·重组真核表达质粒转化感受态细胞DH5α | 第64-65页 |
| ·DEV gM基因的重组表达质粒的鉴定 | 第65-66页 |
| ·重组真核表达质粒的酶切鉴定 | 第65页 |
| ·重组真核表达质粒的PCR鉴定 | 第65-66页 |
| ·DEF的制备 | 第66页 |
| ·转染试剂的制备 | 第66页 |
| ·DEV gM蛋白在DEF中的细胞定位 | 第66页 |
| ·DEV gN与gM蛋白在DEF中的共定位 | 第66页 |
| ·荧光信号检测 | 第66-67页 |
| 3 结果 | 第67-71页 |
| ·DEV gM基因的扩增 | 第67页 |
| ·重组表达质粒pDsRed1-N1/gM的鉴定 | 第67-68页 |
| ·DEV gM蛋白的细胞定位 | 第68页 |
| ·DEV gN蛋白与gM蛋白的共定位分析 | 第68-71页 |
| 4 讨论 | 第71-73页 |
| ·蛋白之间相互作用的研究方法 | 第71-72页 |
| ·DEV gN蛋白与gM蛋白的共定位分析 | 第72-73页 |
| 第六章 基于DEV gN基因的鸭肠炎病毒PCR诊断方法的建立与优化 | 第73-80页 |
| 1 材料 | 第73-74页 |
| ·毒株/菌株/病料组织 | 第73页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·主要仪器 | 第73-74页 |
| 2 方法 | 第74-75页 |
| ·引物设计与合成 | 第74页 |
| ·核酸DNA的提取 | 第74页 |
| ·病毒DNA的提取 | 第74页 |
| ·细菌核酸的提取 | 第74页 |
| ·组织DNA的提取 | 第74页 |
| ·DEV gN基因PCR扩增检测DVE的建立及优化 | 第74-75页 |
| ·DEV gN基因PCR扩增检测DVE的建立 | 第74-75页 |
| ·DEV gN基因PCR方法的特异性检验 | 第75页 |
| ·DEV gN基因PCR方法的灵敏性检验 | 第75页 |
| ·DEV gN基因PCR方法的检测病料组织 | 第75页 |
| 3 结果 | 第75-78页 |
| ·DEV gN基因的PCR扩增结果 | 第75-76页 |
| ·PCR反应的特异性 | 第76-77页 |
| ·PCR反应的灵敏性检测 | 第77页 |
| ·病料组织的PCR检测 | 第77-78页 |
| 4 讨论 | 第78-80页 |
| 第三部分 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-91页 |
| 附录 | 第91-95页 |
| 1 DEV gN基因的测序图谱 | 第91-92页 |
| 2 DEV gM基因的测序图谱 | 第92-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 在攻读硕士研究生期间已撰写论文 | 第96页 |
