| 中文摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 材料与方法 | 第17-40页 |
| 一、实验材料 | 第17-27页 |
| 1. 细胞 | 第17页 |
| 2. 组织标本 | 第17-20页 |
| 3. 动物 | 第20页 |
| 4. 主要试剂 | 第20-24页 |
| 5. 主要仪器与设备 | 第24-25页 |
| 6. 计算机分析软件 | 第25页 |
| 7. 主要自配试剂及其配方 | 第25-27页 |
| 二、实验方法 | 第27-40页 |
| 1. 细胞培养 | 第27页 |
| 2. 无血清杂交瘤上清的收集 | 第27页 |
| 3. ELISA酶联免疫吸附试验 | 第27-29页 |
| 4. PKH26染色 | 第29页 |
| 5. 流式细胞荧光 | 第29-30页 |
| 6. 细胞免疫荧光 | 第30-32页 |
| 7. 免疫组织化学检测 | 第32页 |
| 8. 胃癌干细胞体外生物学特征的分析 | 第32-34页 |
| 9. 胃癌干细胞体内致瘤能力的分析 | 第34页 |
| 10. 抗胃癌干细胞单抗对胃癌干细胞生物学功能影响的分析 | 第34-35页 |
| 11. 动物实验 | 第35-36页 |
| 12. Western blotting及斑点杂交(Dot blot)实验 | 第36-38页 |
| 13. 疏水层析纯化IgM抗体 | 第38页 |
| 14. 抗原纯化鉴定 | 第38-39页 |
| 15. 统计学分析 | 第39-40页 |
| 第一部分 人胃癌干细胞的分离与鉴定 | 第40-60页 |
| 一、实验结果 | 第40-55页 |
| (一) 人胃癌细胞系SNU-5中肿瘤干细胞的分离鉴定 | 第40-49页 |
| 1. 人胃癌细胞系SNU-5的sphere培养及PKH26染色 | 第40-41页 |
| 2. SNU-5亲本细胞及sphere细胞的顺铂耐药性分析 | 第41-42页 |
| 3. 流式细胞术检测SNU-5细胞系中CSC标志物的表达 | 第42-43页 |
| 4. 活细胞免疫荧光检测SNU-5细胞中CD90的表达 | 第43页 |
| 5. 固定细胞流式荧光检测SNU-5细胞中CD90的表达 | 第43-44页 |
| 6. 球体染色检测CD90在sphere细胞球中的表达 | 第44-45页 |
| 7. 不同肺转移特征的SNU-5细胞系CSC标志物的表达 | 第45页 |
| 8. SNU-5 CD90~+细胞自我更新能力分析 | 第45-47页 |
| 9. SNU-5 CD90~+细胞侵袭能力分析 | 第47页 |
| 10. SNU-5 CD90~+细胞SCID鼠致瘤能力分析 | 第47-49页 |
| (二) 人胃癌组织中胃癌原代细胞的分离测定 | 第49-55页 |
| 1. 人胃癌组织中癌细胞的分离及原代培养 | 第49页 |
| 2. 流式荧光检测人胃癌组织原代细胞干细胞标志物的表达 | 第49-50页 |
| 3. 固定细胞荧光检测人胃癌原代细胞CSC标志物的表达 | 第50-52页 |
| 4. 人胃癌组织细胞中CD90的表达水平 | 第52页 |
| 5. 免疫组化检测CD90在人胃癌组织中的表达及临床相关性分析 | 第52-55页 |
| 二、讨论 | 第55-59页 |
| 三、小结 | 第59-60页 |
| 第二部分 抗人胃癌干细胞单抗的筛选与鉴定 | 第60-97页 |
| 一、实验结果 | 第60-91页 |
| (一) 抗人胃癌干细胞单抗的筛选 | 第60-64页 |
| 1. 抗人胃癌干细胞单抗库的制备与初筛 | 第60页 |
| 2. 19株抗人胃癌单抗的类和亚类的测定 | 第60-61页 |
| 3. 差异活细胞免疫荧光筛选抗人胃癌干细胞单抗 | 第61-64页 |
| 4. 流式免疫荧光筛选抗人胃癌干细胞单抗 | 第64页 |
| (二) 抗人胃癌干细胞单抗15D2的研究 | 第64-82页 |
| 1. 流式细胞术检测15D2~+细胞在SNU-5 sphere细胞中的富集 | 第64-65页 |
| 2. 细胞免疫荧光检测15D2识别的抗原在SNU-5细胞中的定位 | 第65-66页 |
| 3. 双色细胞免疫荧光检测15D2与CD90~+胃癌干细胞的共染 | 第66页 |
| 4. 双色流式荧光检测15D2与CD90~+胃癌干细胞的共染比例 | 第66-67页 |
| 5. 15D2~+细胞体外侵袭能力分析 | 第67-68页 |
| 6. 15D2+细胞裸鼠致瘤性分析 | 第68-69页 |
| 7. 15D2单克隆抗体的纯化 | 第69-70页 |
| 8. 15D2单抗抑制胃癌亲本及sphere细胞增殖能力的比较 | 第70-71页 |
| 9. 15D2单抗抑制胃癌细胞的侵袭能力分析 | 第71-72页 |
| 10. 15D2单抗抑制胃癌细胞自我更新能力分析 | 第72-73页 |
| 11. 15D2单抗抑制CD90~+胃癌干细胞自我更新能力分析 | 第73-74页 |
| 12. SNU-5细胞系裸鼠移植瘤模型的建立 | 第74-75页 |
| 13. 15D2单抗靶向胃癌干细胞治疗胃癌的体内试验研究 | 第75-76页 |
| 14. WB鉴定15D2识别的靶抗原的分子量 | 第76-77页 |
| 15. 15D2靶抗原的分离鉴定 | 第77-80页 |
| 16. 15D2靶抗原的回证分析 | 第80-82页 |
| (三) 抗人胃癌干细胞单抗9A9的研究 | 第82-91页 |
| 1. 流式荧光检测9A9~+细胞在SNU-5 sphere细胞中的富集 | 第82页 |
| 2. PKH26检测9A9识别胃癌干细胞 | 第82-83页 |
| 3. 细胞免疫荧光检测9A9识别的抗原在SNU-5细胞中的定位 | 第83-84页 |
| 4. 双色细胞免疫荧光检测9A9与CD90~+胃癌干细胞的共染 | 第84-85页 |
| 5. 双色流式荧光检测9A9与CD90~+胃癌干细胞的共染比例 | 第85-86页 |
| 6. 9A9单克隆抗体的纯化 | 第86页 |
| 7. 9A9单抗抑制胃癌亲本及sphere细胞增殖能力的比较 | 第86-87页 |
| 8. 9A9单抗抑制胃癌细胞的侵袭能力分析 | 第87-88页 |
| 9. 9A9单抗抑制胃癌细胞自我更新能力分析 | 第88-89页 |
| 10. WB鉴定9A9识别的靶抗原的分子量 | 第89-91页 |
| 二、讨论 | 第91-95页 |
| 三、小结 | 第95-97页 |
| 论文综述 | 第97-101页 |
| 参考文献 | 第101-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 附录 | 第108-109页 |
| 个人简历 | 第109-110页 |
| 基金资助情况 | 第110-111页 |
