| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第一篇 文献综述 | 第13-47页 |
| 第一章 传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的研究进展 | 第13-33页 |
| 1. IHHNV简介 | 第13-18页 |
| ·IHHNV的发现 | 第13页 |
| ·IHHNV的流行病学调查和分子流行病学研究进展 | 第13-15页 |
| ·IHHNV的易感动物 | 第15页 |
| ·IHHNV的临床症状 | 第15-16页 |
| ·IHHNV的病理特征 | 第16-17页 |
| ·IHHNV的毒力变化 | 第17页 |
| ·IHHNV的传播途径和传播机制 | 第17-18页 |
| 2 IHHNV的分子生物学特征 | 第18-21页 |
| ·IHHNV的病毒特性及分类地位 | 第18页 |
| ·IHHNV物理化学特性 | 第18-19页 |
| ·已公布的IHHNV基因序列 | 第19-20页 |
| ·IHHNV的基因组结构 | 第20页 |
| ·IHHNV(加利福尼亚分离株)基因组的结构分析 | 第20-21页 |
| 3 IHHNV的诊断方法 | 第21-26页 |
| ·传统方法 | 第21-22页 |
| ·分子生物学方法 | 第22-26页 |
| ·免疫学方法 | 第26页 |
| 4 小结 | 第26-28页 |
| 参考文献 | 第28-33页 |
| 第二章 免疫胶体金技术的研究进展 | 第33-47页 |
| 1. 胶体金颗粒的结构 | 第33页 |
| 2. 免疫胶体金发展的历史 | 第33-34页 |
| 3. 免疫胶体金技术的基本原理 | 第34-35页 |
| 4. 免疫胶体金颗粒的制备 | 第35-36页 |
| 5. 免疫胶体金检测技术的方法 | 第36-38页 |
| ·斑点免疫金渗滤试验 | 第37-38页 |
| ·胶体金免疫层析试验 | 第38页 |
| 6 免疫胶体金的应用 | 第38-41页 |
| ·斑点免疫金渗滤试验的应用 | 第38-39页 |
| ·胶体金免疫层析试验的应用 | 第39-41页 |
| 7 胶体金免疫技术的应用前景 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 第二篇 试验研究 | 第47-111页 |
| 第一章 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(江苏赣榆株)基因组的克隆 | 第47-63页 |
| 摘要 | 第47页 |
| 1 材料 | 第47-49页 |
| ·毒株 | 第47-48页 |
| ·主要酶与试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器设备 | 第48页 |
| ·PCR引物设计 | 第48-49页 |
| 2 方法 | 第49-54页 |
| ·病料组织中DNA的提取 | 第50页 |
| ·IHHNV病毒粒子的检测 | 第50-51页 |
| ·IHHNV末端加尾 | 第51页 |
| ·快速扩增cDNA末端 | 第51-52页 |
| ·IHHNV(江苏赣榆株)基因片段的扩增 | 第52-53页 |
| ·PCR产物的鉴定回收与纯化 | 第53页 |
| ·PCR产物的T/A连接 | 第53页 |
| ·连接产物的转化(热激法) | 第53-54页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第54页 |
| ·测序分析 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-60页 |
| ·IHHNV检测结果 | 第54页 |
| ·IHHNV基因3’和5’端PCR扩增结果 | 第54-55页 |
| ·IHHNV各基因片段PCR扩增结果 | 第55页 |
| ·江苏赣榆株IHHNV DNA两末端序列分析 | 第55-58页 |
| ·江苏赣榆株IHHNV全基因组的序列分析 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-62页 |
| Abstract | 第62-63页 |
| 第二章 传染性皮下及造血组织坏死病毒CP1基因保守区的克隆表达 | 第63-79页 |
| 摘要 | 第63页 |
| 1 材料 | 第63-64页 |
| ·毒株 | 第63-64页 |
| ·菌株 | 第64页 |
| ·主要酶和试剂 | 第64页 |
| ·主要仪器设备 | 第64页 |
| ·PCR引物设计 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64-69页 |
| ·病料组织中DNA的提取 | 第64-65页 |
| ·PCR扩增CP1目的基因 | 第65页 |
| ·PCR产物的鉴定、回收与纯化 | 第65页 |
| ·PCR产物的T/A连接 | 第65页 |
| ·连接产物的转化(热激法) | 第65页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定及测序 | 第65-66页 |
| ·原核表达质粒pET28a-CP1的构建 | 第66页 |
| ·酶连产物的转化(热激法) | 第66页 |
| ·重组质粒pET28a-CP1的双酶切鉴定 | 第66-67页 |
| ·测序分析 | 第67页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第67页 |
| ·SDS-PAGE检测重组蛋白的表达 | 第67-68页 |
| ·pET28a-CP1重组蛋白的纯化与复性 | 第68-69页 |
| 3 结果 | 第69-74页 |
| ·目的基因CP1的PCR扩增结果 | 第69-70页 |
| ·重组质粒pET28a-CP1的PCR鉴定和双酶切鉴定结果 | 第70-71页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第71-73页 |
| ·融合蛋白的纯化与鉴定 | 第73-74页 |
| 4 讨论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-77页 |
| Abstract | 第77-79页 |
| 第三章 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒融合蛋白pET28a-CP1的多克隆抗体的制备与纯化 | 第79-97页 |
| 摘要 | 第79页 |
| 1 材料 | 第79-80页 |
| ·菌种 | 第79-80页 |
| ·实验动物 | 第80页 |
| ·主要试剂 | 第80页 |
| ·主要仪器设备 | 第80页 |
| 2 方法 | 第80-84页 |
| ·抗原蛋白含量的测定方法的建立 | 第80页 |
| ·透析和抗原蛋白浓度的测定 | 第80页 |
| ·免疫接种 | 第80-81页 |
| ·采血及分离血清 | 第81页 |
| ·多克隆抗体效价的测定 | 第81-82页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第82页 |
| ·IHHNV病毒的粗提 | 第82-83页 |
| ·Western blot分析 | 第83-84页 |
| 3 结果 | 第84-92页 |
| ·抗原蛋白含量的测定方法的建立 | 第84页 |
| ·鼠抗/兔抗pET28a-CP1融合蛋白的间接ELISA方阵滴定结果 | 第84-89页 |
| ·多克隆抗体效价测定 | 第89-91页 |
| ·多克隆抗体纯化结果 | 第91页 |
| ·Western blot分析结果 | 第91-92页 |
| 4 讨论 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-95页 |
| Abstract | 第95-97页 |
| 第四章 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒胶体金免疫层析检测法的初步研究 | 第97-111页 |
| 摘要 | 第97页 |
| 1 材料 | 第97-98页 |
| 2 方法 | 第98-102页 |
| ·玻璃器皿的清洁 | 第98页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第98页 |
| ·纯化抗体透析及浓度测定 | 第98页 |
| ·胶体金标记抗体最佳pH的测定 | 第98-99页 |
| ·胶体金标记抗体最佳抗体蛋白结合量的测定 | 第99页 |
| ·胶体金标记兔抗CP1融合蛋白多克隆抗体 | 第99-100页 |
| ·样品垫的制备 | 第100页 |
| ·金标垫的制备 | 第100页 |
| ·印模 | 第100-101页 |
| ·胶体金试纸条的组装 | 第101页 |
| ·胶体金试纸条的检测标准 | 第101-102页 |
| 3 结果 | 第102-105页 |
| ·胶体金标记抗体最佳pH | 第102-103页 |
| ·胶体金标记抗体最佳抗体蛋白结合量 | 第103-104页 |
| ·胶体金快速检测试纸条的组装与检测 | 第104-105页 |
| 4 讨论 | 第105-108页 |
| ·抗体的纯化透析 | 第105-106页 |
| ·胶体金的质量 | 第106页 |
| ·缓冲液的选择 | 第106页 |
| ·免疫层析材料的选择 | 第106页 |
| ·胶体金标记抗体的最佳pH值 | 第106-107页 |
| ·胶体金标记抗体的抗体浓度 | 第107页 |
| ·免疫胶体金的保存 | 第107页 |
| ·检测结果 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-109页 |
| Abstract | 第109-111页 |
| 全文总结 | 第111-113页 |
| 附录 实验所需试剂配制 | 第113-117页 |
| 致谢 | 第117页 |
