北极来源的亚铁螯合酶基因功能研究以及Kalafungin产生菌基因组文库构建
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| ·北极深海沉积物 | 第13-14页 |
| ·亚铁螯合酶 | 第14-17页 |
| ·亚铁螯合酶概述 | 第14页 |
| ·亚铁螯合酶特性 | 第14-15页 |
| ·亚铁螯合酶生物学功能 | 第15页 |
| ·卟啉症 | 第15-16页 |
| ·亚铁螯合酶基因的研究进展 | 第16-17页 |
| ·链霉菌概述 | 第17-18页 |
| ·抗生素与链霉菌 | 第18页 |
| ·Kalafungin | 第18-19页 |
| ·基因组文库 | 第19页 |
| ·本项目研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 北极来源的亚铁螯合酶基因功能研究 | 第21-41页 |
| ·实验材料 | 第21-25页 |
| ·亚铁螯合酶基因来源 | 第21页 |
| ·菌株和质粒 | 第21-22页 |
| ·主要试剂 | 第22-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·主要的生物学软件 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-31页 |
| ·实验技术路线 | 第25页 |
| ·PCR扩增ccs24-7-f功能基因 | 第25-26页 |
| ·构建重组表达载体 | 第26-28页 |
| ·双酶切鉴定阳性克隆子 | 第28页 |
| ·三次单斑纯化 | 第28-29页 |
| ·IPTG诱导蛋白表达 | 第29-30页 |
| ·蛋白产物的纯化 | 第30页 |
| ·亚铁螯合酶活性测定 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-38页 |
| ·ccs24-7-f生物信息学分析 | 第31-34页 |
| ·ccs24-7-f基因克隆 | 第34-35页 |
| ·IPTG诱导蛋白表达 | 第35-36页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·最适温度及pH测定 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-41页 |
| ·原核表达载体的选择 | 第38页 |
| ·诱导表达过程 | 第38-39页 |
| ·蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·酶的活性测定 | 第40-41页 |
| 第三章 kalafungin产生菌基因组文库构建 | 第41-53页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·菌株与载体 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41-42页 |
| ·试剂盒 | 第42页 |
| ·其它试剂 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-47页 |
| ·实验技术路线 | 第42-43页 |
| ·提取基因组总DNA | 第43页 |
| ·16 SrDNA分析 | 第43-44页 |
| ·物理切割基因组总DNA | 第44页 |
| ·插入DNA的末端修复 | 第44-45页 |
| ·末端修复DNA的大小选择 | 第45页 |
| ·回收已分离大小的DNA | 第45-46页 |
| ·DNA与载体连接 | 第46页 |
| ·体外包装,感染大肠杆菌 | 第46-47页 |
| ·基因组文库质量检测 | 第47页 |
| ·重组子扩大培养 | 第47页 |
| ·基因组文库保存 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-51页 |
| ·固体培养,收集孢子 | 第47-48页 |
| ·液体培养,提取总DNA | 第48页 |
| ·16 SrDNA分析 | 第48-49页 |
| ·基因组文库质量检测 | 第49-51页 |
| ·重组子扩大培养和96孔板保存文库 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
