| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-20页 |
| ·细小病毒的概述 | 第11-13页 |
| ·细小病毒的形态结构 | 第11页 |
| ·细小病毒的分类 | 第11-12页 |
| ·细小病毒的流行病学 | 第12-13页 |
| ·博卡病毒属的概述 | 第13页 |
| ·人类博卡病毒的概述 | 第13-15页 |
| ·人类博卡病毒的形态结构 | 第13-14页 |
| ·人类博卡病毒的亚型 | 第14页 |
| ·人类博卡病毒的流行病学 | 第14-15页 |
| ·杆状病毒的概述 | 第15-16页 |
| ·相关载体的概述 | 第16-18页 |
| ·pMal-c2x的概述 | 第16页 |
| ·pEGFP-N1的概述 | 第16-17页 |
| ·pFastBac1的概述 | 第17页 |
| ·pcDNA3.1(+)的概述 | 第17-18页 |
| ·本课题研究的目的及意义 | 第18-20页 |
| 第二章 实验材料 | 第20-24页 |
| ·实验所需仪器和材料 | 第20页 |
| ·实验仪器 | 第20页 |
| ·菌株、质粒、细胞 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·常用培养基和溶液的配制 | 第20-24页 |
| ·细菌培养基的配制 | 第20-21页 |
| ·DNA电泳所需溶液的配制 | 第21页 |
| ·碱裂解法提质粒溶液的配制 | 第21页 |
| ·SDS-PAGE电泳溶液的配制 | 第21-22页 |
| ·Western Blot溶液的配制 | 第22页 |
| ·pMal-c2x蛋白纯化溶液的配制 | 第22-23页 |
| ·各种抗生素的配制 | 第23页 |
| ·IPTG和X-gal的配制 | 第23页 |
| ·细胞培养所需溶液的配制 | 第23-24页 |
| 第三章 实验方法 | 第24-35页 |
| ·人类博卡病毒非结构蛋白NS1和NP1重组杆状病毒的制备 | 第24-27页 |
| ·引物设计和合成 | 第24页 |
| ·重组供体质粒的构建 | 第24-25页 |
| ·pFB-BoV-EGFP重组质粒的构建 | 第24-25页 |
| ·pFB-BoV-EGFP-NSl/NPl 重组质粒的构建 | 第25页 |
| ·Bac-BoV-EGFP、Bac-BoV-EGFp-NS1/NP1的制备与鉴定 | 第25-27页 |
| ·重组杆状病毒Bac-BoV-EGFP、Bac-BoV-EGFP-NS1/NP1的制备 | 第27页 |
| ·人类博卡病毒非结构蛋白NS1抗原表位(C端1423-2172NT：750 BP)多克隆抗体的制备 | 第27-30页 |
| ·引物的设计和合成 | 第27页 |
| ·重组质粒的构建及验证 | 第27-28页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第28页 |
| ·Western Blot验证融合蛋白 | 第28-29页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳分离融合蛋白 | 第28页 |
| ·半干转膜 | 第28-29页 |
| ·融合蛋白免疫检测 | 第29页 |
| ·融合蛋白最佳诱导条件的确定 | 第29页 |
| ·融合蛋白的大量表达及Amylose亲和纯化 | 第29-30页 |
| ·融合蛋白的大量表达 | 第29页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第29-30页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第30页 |
| ·人类博卡病毒非结构蛋白NP1在HELA细胞中核定位信号的初探 | 第30-33页 |
| ·引物的设计和合成 | 第30-32页 |
| ·pEGFP-N1-NP1截短重组质粒的构建 | 第32页 |
| ·观察NP1蛋白在HeLa细胞中的荧光分布 | 第32-33页 |
| ·PCDNA3.1(+)-NP1截短重组质粒的构建 | 第33-35页 |
| ·引物设计和合成 | 第33-34页 |
| ·pcDNA3.1(+)-NP1截短重组质粒的构建 | 第34-35页 |
| 第四章 实验结果 | 第35-49页 |
| ·人类博卡病毒非结构蛋白NS1和NP1重组杆状病毒的构建 | 第35-39页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·HBoV+EGFP基因的PCR扩增 | 第35页 |
| ·NS1/NP1基因的PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·供体质粒的双切及重组供体质粒的验证 | 第36-37页 |
| ·pFB-BoV-EGFP重组质粒的双切处理 | 第36页 |
| ·pFB-BoV-EGFP-NS1/NP1重组供体质粒的验证 | 第36-37页 |
| ·Bac-BoV-EGFP、Bac-BoV-EGFP-NS1/NP1重组bacmid验证 | 第37-38页 |
| ·重组杆状病毒Bac-BoV-EGFP、Bac-BoV-EGFP-NS1/NP1的制备 | 第38-39页 |
| ·人类博卡病毒非结构蛋白NS1抗原表位(C端1423-2172 NT：750 BP)多克隆抗体的制备 | 第39-43页 |
| ·PCR扩增目的片段及载体双切处理 | 第39-40页 |
| ·重组质粒pMal-c2x-NS1截短的验证 | 第40-41页 |
| ·Western Blot验证融合蛋白 | 第41页 |
| ·融合蛋白最佳诱导条件的确定 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白的大量表达及纯化 | 第42-43页 |
| ·鉴定多克隆抗体 | 第43页 |
| ·人类博卡病毒非结构蛋白NP1在HELA细胞中核定位信号的初探 | 第43-47页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的构建和验证 | 第44-46页 |
| ·观察NP1蛋白在HeLa细胞中的荧光分布 | 第46-47页 |
| ·PCDNA3.1(+)-NP1截短重组质粒的构建 | 第47-49页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第47-48页 |
| ·pcDNA3.1(+)重组质粒的构建和验证 | 第48-49页 |
| 第五章 讨论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
