| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 英文缩略语表 | 第11-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-27页 |
| ·萜类化合物概述 | 第13-15页 |
| ·概念 | 第13页 |
| ·分类和功能 | 第13-15页 |
| ·萜类化合物的合成途径 | 第15-18页 |
| ·两条生物合成途径及其分布 | 第15页 |
| ·甲羟戊酸途径(MVA pathway) | 第15-17页 |
| ·2-甲基-D-赤藻糖醇-4-磷酸途径(MEP pathway) | 第17-18页 |
| ·1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶研究进展及磷酸丙糖异构酶概况 | 第18-24页 |
| ·DXS在MEP途径中的关键作用 | 第18-21页 |
| ·TIM及磷酸丙糖异构化作用 | 第21-24页 |
| ·MEP生物合成途径的研究意义 | 第24-25页 |
| ·MEP途径在抗生素开发方面的应用 | 第24-25页 |
| ·MEP途径在农业生产方面的应用 | 第25页 |
| ·本课题研究意义 | 第25-27页 |
| 第二章 DXS酶的诱导表达和pPROEX(TM)HTb-EcTIM重组质粒构建及TIM酶的表达纯化 | 第27-41页 |
| ·材料 | 第27-31页 |
| ·菌株 | 第27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·所需试剂 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·主要试剂的配制 | 第28-31页 |
| ·DXS的表达纯化和TIM的重组质粒构建及表达纯化 | 第31-36页 |
| ·DXS的制备 | 第31-32页 |
| ·重组pPROEX~(TM)HTb-EcTIM质粒的构建和表达纯化 | 第32-34页 |
| ·重组质粒pPROEX(TM)HTb-EcTIM的构建 | 第32-33页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·化学转化—热击法 | 第33-34页 |
| ·重组TIM的诱导表达及纯化 | 第34页 |
| ·DXS和TIM的浓度、纯度以及活性测定 | 第34-36页 |
| ·Brandford法测定DXS和TIM的浓度 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE检验DXS和TIM的表达及纯度 | 第34页 |
| ·DXS和TIM催化活性的验证 | 第34-36页 |
| ·本章实验结果与讨论 | 第36-40页 |
| ·DXS诱导表达纯化结果 | 第36页 |
| ·重组质粒HTb-EcTIM构建和诱导表达纯化结果 | 第36-38页 |
| ·Brandford法测定DXS和TIM两种酶浓度结果 | 第38页 |
| ·PC法测定DXS酶催化DXP生成的活性结果 | 第38-39页 |
| ·柱前衍生-HPLC检测DXS和TIM磷酸丙糖异构化活性 | 第39-40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 第三章 DXS与TIM催化磷酸丙糖异构化反应的比活力及热力学平衡过程比较 | 第41-52页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·试剂 | 第41页 |
| ·仪器 | 第41页 |
| ·主要试剂配制 | 第41-42页 |
| ·DXS与TIM催化磷酸丙糖异构化的比活力测定与比较 | 第42-44页 |
| ·NADH标准曲线的制作 | 第42页 |
| ·DXS和TIM酶的比活力测定 | 第42-44页 |
| ·DXS酶的比活力测定—酶联-紫外法 | 第42-44页 |
| ·TIM酶的比活力的测定—酶联-紫外法 | 第44页 |
| ·TIM和DXS催化磷酸丙糖异构化反应的热力学平衡过程 | 第44-47页 |
| ·TIM催化的磷酸丙糖异构化反应 | 第44-46页 |
| ·DXS催化的磷酸丙糖异构化反应 | 第46-47页 |
| ·本章实验结果与讨论 | 第47-51页 |
| ·NADH标准曲线 | 第47页 |
| ·DXS和TIM酶的比活力测定的结果 | 第47-48页 |
| ·DXS和TIM分别催化磷酸丙糖异构化反应的热力学研究结果 | 第48-51页 |
| ·一定酶浓度下,DXS和TIM分别催化磷酸丙糖异构化反应达到平衡所需时间及结果比较 | 第48-49页 |
| ·一定反应时间下,DXS和TIM分别催化磷酸丙糖异构化反应达到平衡所需酶量及结果比较 | 第49-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 DXS催化磷酸丙糖异构化反应的金属离子依赖性及Ketoclomazone对其异构化活性的抑制研究 | 第52-67页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·仪器 | 第52页 |
| ·主要试剂配制 | 第52-53页 |
| ·DXS催化磷酸丙糖异构化时金属离子依赖性研究 | 第53-56页 |
| ·三种二价金属阳离子对DXS催化磷酸丙糖异构化反应的影响 | 第53-54页 |
| ·柱前衍生—HPLC法考察镁离子对DXS催化活性影响 | 第54-56页 |
| ·Ketoclomazone对DXS抑制作用的研究 | 第56-58页 |
| ·Ketoclomazone对DXS催化D-GAP和Pyr生成DXP反应的抑制 | 第56-57页 |
| ·Ketoclomazone对DXS催化D-GAP异构为DHAP的抑制 | 第57-58页 |
| ·实验结果与讨论 | 第58-66页 |
| ·DXS异构化作用的金属离子依赖性研究结果 | 第58-64页 |
| ·Ketoclomazone对DXS抑制作用的研究结果 | 第64-66页 |
| ·本章小结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
