| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 缩略语 | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-15页 |
| 1 家蚕血淋巴蛋白的研究概况 | 第11页 |
| 2 家蚕 30K 蛋白的研究进展 | 第11-12页 |
| 3 家蚕 Slp 蛋白研究进展 | 第12页 |
| 4 H2O2诱导的细胞凋亡研究进展 | 第12-13页 |
| 5 杆状病毒表达系统概述 | 第13-14页 |
| 6 展望 | 第14-15页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第15-17页 |
| 1 实验目的及意义 | 第15页 |
| 2 实验内容 | 第15-16页 |
| 3 实验流程图 | 第16-17页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第17-24页 |
| 1 所用工具 | 第17页 |
| 2 方法 | 第17页 |
| 3 结果 | 第17-22页 |
| ·Slp 蛋白氨基酸序列的筛选 | 第17-19页 |
| ·编码 Slp 蛋白的基因序列 Slp 及分析 | 第19页 |
| ·Slp 蛋白的疏水性分析 | 第19-20页 |
| ·Slp 蛋白的跨膜区分析 | 第20页 |
| ·Slp 蛋白的信号肽分析 | 第20-21页 |
| ·Slp 蛋白的二级结构预测 | 第21页 |
| ·Slp 蛋白的三级结构预测及分析 | 第21-22页 |
| ·Slp 蛋白的亚细胞定位预测 | 第22页 |
| ·家蚕 Slp 蛋白的糖基化位点预测 | 第22页 |
| 4 讨论 | 第22-24页 |
| 第四章 家蚕 Slp 基因的表达、纯化和多克隆抗体制备 | 第24-42页 |
| 1 材料与试剂 | 第24-27页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·主要试剂的配制 | 第24-27页 |
| 2 方法 | 第27-36页 |
| ·家蚕脂肪体总 RNA 的提取和 cDNA 的合成 | 第27-28页 |
| ·重组质粒 pET-28a(+)-Slp 的构建 | 第28-30页 |
| ·制备大肠杆菌感受态细胞 | 第30-31页 |
| ·连接产物转化 TG1 感受态细胞 | 第31页 |
| ·筛选和鉴定重组质粒 pET-28a(+)-Slp | 第31-32页 |
| ·重组质粒 pET-28a(+)-Slp 转化 BL21 感受态细胞及鉴定 | 第32页 |
| ·大肠杆菌中的诱导表达重组 Slp 蛋白 | 第32页 |
| ·蛋白的定量（Bradford 法） | 第32页 |
| ·蛋白凝胶电泳检测 | 第32-34页 |
| ·Western blotting 检测重组蛋白 Slp 表达 | 第34页 |
| ·纯化重组蛋白 Slp | 第34-35页 |
| ·制备多克隆抗体 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-40页 |
| ·Slp 基因的 PCR 扩增 | 第36-37页 |
| ·鉴定重组质粒 pET-28a(+)-Slp | 第37页 |
| ·重组质粒 pET-28a(+)-Slp 在大肠杆菌中的表达鉴定 | 第37-38页 |
| ·家蚕 Slp 蛋白的纯化鉴定 | 第38-39页 |
| ·测定多克隆抗体效价 | 第39页 |
| ·Western blotting 检测制备的多克隆抗体特异性 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第五章 家蚕 Slp 蛋白的组织定位及亚细胞定位 | 第42-47页 |
| 1 材料与试剂 | 第42-43页 |
| ·材料与仪器 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42页 |
| ·配制试剂 | 第42-43页 |
| 2 方法 | 第43-44页 |
| ·提取家蚕各个发育时期及五龄幼虫各组织的总蛋白 | 第43页 |
| ·家蚕 Slp 蛋白在家蚕各发育时期及五龄幼虫各个组织的表达分析 | 第43-44页 |
| ·亚细胞定位分析 | 第44页 |
| 3 结果 | 第44-45页 |
| ·家蚕 Slp 蛋白在家蚕各发育时期的表达 | 第44-45页 |
| ·家蚕 Slp 蛋白在家蚕 5 龄幼虫各组织的表达分布 | 第45页 |
| ·家蚕 Slp 蛋白亚细胞定位分析结果 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 第六章 家蚕 Slp 蛋白在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及纯化 | 第47-56页 |
| 1 材料与试剂 | 第47-49页 |
| ·材料与仪器 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·实验用试剂配制 | 第47-49页 |
| 2 方法 | 第49-52页 |
| ·重组 Bacmid-Slp 的构建 | 第49-50页 |
| ·细胞的复苏与冻存 | 第50-51页 |
| ·重组 Bacmid-Slp 借助脂质体介导法转染家蚕 BmN 细胞 | 第51-52页 |
| ·病毒滴度测定 | 第52页 |
| ·BmN 细胞中表达重组蛋白 Slp | 第52页 |
| ·纯化重组蛋白 Slp | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-55页 |
| ·重组转移载体 pFastBacHTb-Slp PCR 与双酶切鉴定 | 第52-53页 |
| ·重组病毒 Bacmid-Slp 的鉴定 | 第53页 |
| ·重组蛋白在 BmN 细胞中表达的鉴定 | 第53-55页 |
| ·纯化的重组蛋白Slp的鉴定 | 第55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| 第七章 Slp 蛋白的抗凋亡功能研究 | 第56-64页 |
| 1 材料和试剂 | 第56页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| ·试剂的配制 | 第56页 |
| 2 方法 | 第56-59页 |
| ·家蚕 BmN 细胞的培养 | 第56页 |
| ·人脐静脉血管内皮细胞的传代培养、复苏与冻存 | 第56-57页 |
| ·Slp 蛋白对 H2O2处理的 BmN 细胞凋亡的影响 | 第57-58页 |
| ·Slp 蛋白对 H2O2处理的 HUVEC 细胞凋亡的影响 | 第58-59页 |
| 3 结果 | 第59-61页 |
| ·Slp 蛋白对 H2O2诱导的 BmN 细胞的影响 | 第59-61页 |
| ·Slp 蛋白对 H2O2诱导的 HUVEC 细胞凋亡的影响 | 第61页 |
| 4 讨论 | 第61-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
