| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 引言 | 第8-18页 |
| ·丁二酸概况 | 第8-9页 |
| ·丁二酸简介 | 第8页 |
| ·丁二酸用途 | 第8页 |
| ·丁二酸市场 | 第8-9页 |
| ·国内外丁二酸生产方法 | 第9-10页 |
| ·化学合成法 | 第9页 |
| ·生物转化法[7] | 第9页 |
| ·微生物发酵法 | 第9-10页 |
| ·国内外产丁二酸微生物研究现状 | 第10-16页 |
| ·产琥珀酸放线杆菌 | 第10-11页 |
| ·产琥珀酸厌氧螺菌 | 第11-12页 |
| ·曼海姆产琥珀酸菌 | 第12-13页 |
| ·大肠杆菌及其基因工程菌 | 第13-14页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌 | 第14-16页 |
| ·代谢工程育种 | 第16-17页 |
| ·本论文研究的主要内容及意义 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-28页 |
| ·实验材料 | 第18-21页 |
| ·菌株、质粒及引物 | 第18-19页 |
| ·实验试剂 | 第19-20页 |
| ·实验仪器 | 第20页 |
| ·培养基及培养条件 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-26页 |
| ·大肠杆菌及谷氨酸棒状杆菌基因组提取 | 第21页 |
| ·大肠杆菌及谷氨酸棒状杆菌质粒 DNA 提取方法 | 第21页 |
| ·大肠杆菌 JM109 感受态细胞制备及质粒转化的方法[58] | 第21-22页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌感受态细胞制备及质粒转化的方法 | 第22-23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第23页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第23页 |
| ·常规 PCR 及重叠 PCR | 第23-24页 |
| ·基因及质粒酶切和酶连 | 第24页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌同源重组基因敲除实验[61] | 第24-25页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌产丁二酸的方法 | 第25-26页 |
| ·分析方法 | 第26-28页 |
| ·生物量测定 | 第26页 |
| ·残糖测定 | 第26页 |
| ·酶活测定方法 | 第26页 |
| ·丁二酸及其它主要有机酸检测方法 | 第26-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-44页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌 ATCC13032 合成丁二酸合成途径竞争途径的阻断 | 第28-36页 |
| ·乳酸脱氢酶基因敲除的自杀质粒 pk18mobsacBΔldh 的构建 | 第28-30页 |
| ·丙酮酸脱氢酶基因敲除的自杀质粒 pk18mobsacBΔaceE 的构建 | 第30页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌乳酸脱氢酶基因 (ldh)敲除 | 第30-32页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌丙酮酸脱氢酶基因(aceE)敲除 | 第32页 |
| ·基因敲除酶活验证 | 第32-33页 |
| ·基因缺失突变株生长特性比较 | 第33-34页 |
| ·基因缺失突变株厌氧产酸特性比较 | 第34-35页 |
| ·基因缺失重组菌 CDW-D 产酸稳定性验证 | 第35-36页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌重组菌 CDW-D 外源强化回补途径 | 第36-39页 |
| ·羧化酶基因重组质粒及共表达重组质粒的构建 | 第36-38页 |
| ·羧化酶基因在大肠杆菌 JM109 中的表达 | 第38页 |
| ·羧化酶基因在谷氨酸棒状杆菌中的表达 | 第38-39页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌基因工程菌发酵产酸性能研究 | 第39-44页 |
| ·带有不同质粒的重组菌的生理特性及发酵产酸特性 | 第39-40页 |
| ·温度对产酸的影响 | 第40-41页 |
| ·不同碳源作底物对产酸的影响 | 第41-42页 |
| ·碳酸氢盐对丁二酸产量的影响 | 第42页 |
| ·重组菌 CDW-D2 循环利用厌氧产酸特性 | 第42-44页 |
| 主要结论与展望 | 第44-45页 |
| 主要结论 | 第44页 |
| 展望 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 附录一：重组菌 | 第51-52页 |
| 附录二：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第52页 |
