| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| ·伪狂犬病的概述 | 第12-17页 |
| ·国内外流行概况 | 第12页 |
| ·病原学 | 第12-14页 |
| ·流行病学 | 第14页 |
| ·临床症状和病理变化 | 第14-15页 |
| ·PRV的诊断方法与防治 | 第15-17页 |
| ·伪狂犬病毒gB基因的研究进展 | 第17-20页 |
| ·伪狂犬病毒的结构特征 | 第17页 |
| ·伪狂犬病毒gB基因的结构特征 | 第17页 |
| ·伪狂犬病毒gB基因的生物学特性及功能 | 第17-18页 |
| ·伪狂犬病毒gB基因的免疫学作用 | 第18-19页 |
| ·伪狂犬病毒gB基因在预防诊断方面的研究 | 第19-20页 |
| ·研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| ·研究的内容和方法 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-38页 |
| ·试验材料 | 第22页 |
| ·试验用试剂及其配制 | 第22-24页 |
| ·伪狂犬病毒分离株的分子生物学鉴定 | 第24-26页 |
| ·PRV的增殖和病毒DNA的提取 | 第24页 |
| ·伪狂犬病毒(PRV)gB全基因引物的设计 | 第24页 |
| ·伪狂犬病毒gB基因的PCR扩增与纯化 | 第24-25页 |
| ·伪狂犬病毒gB基因克隆载体的构建 | 第25-26页 |
| ·重组质粒pMD-gB的PCR、单酶切鉴定及序列测定 | 第26页 |
| ·伪狂犬病毒gB基因劳光定量PCR方法的建立 | 第26-28页 |
| ·引物和探针的设计与合成 | 第26-27页 |
| ·pMD-gB阳性标准品的备 | 第27页 |
| ·PRV荧光定量PCR反应条件的优化 | 第27页 |
| ·PRV荧光定量PCR检测极限的测定和标准曲线的建立 | 第27页 |
| ·PRV荧光定量PCR的特异性和重复性试验 | 第27-28页 |
| ·荧光定量PCR与普通PCR检测方法的对比及对临床样品的检测 | 第28页 |
| ·伪狂犬病毒gB抗原表位基因Pichia酵母表达载体的构建及其表达 | 第28-34页 |
| ·伪狂犬病毒gB基因含酶切位点引物的合成 | 第28页 |
| ·gB基因的扩增与纯化 | 第28-29页 |
| ·gB基因Pichia酵母表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·伪狂犬病毒gB基因酵母表达的准备 | 第30-31页 |
| ·伪狂犬病毒gB基因在Pichia酵母中的表达 | 第31-33页 |
| ·表达蛋白SDS-PAGE电泳分析 | 第33页 |
| ·重组蛋白表达条件的优化 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第34页 |
| ·伪狂犬病毒gB抗原表位基因蛋白表达的初步应用 | 第34-38页 |
| ·表达产物间接ELISA方法的建立 | 第34-35页 |
| ·gB抗原包被条件和封闭条件的建立 | 第35页 |
| ·最适封闭液的选择 | 第35页 |
| ·gB-ELISA方法判定标准的建立 | 第35页 |
| ·gB-ELISA方法特异性试验 | 第35-36页 |
| ·重复性试验 | 第36页 |
| ·重组蛋白免疫动物 | 第36页 |
| ·抗体水平的测定 | 第36-37页 |
| ·抗血清标准物质的制备 | 第37-38页 |
| 3 试验结果与分析 | 第38-52页 |
| ·伪狂犬病毒分离株的分子生物学鉴定结果 | 第38-42页 |
| ·伪狂犬病毒的增殖 | 第38-39页 |
| ·伪狂犬病毒gB全基因的PCR扩增与纯化 | 第39页 |
| ·伪狂犬病毒gB基因克隆体的构建 | 第39页 |
| ·重组质粒pMD-gB的PCR、单酶切鉴定及序列测定 | 第39-42页 |
| ·伪狂犬病毒gB基因荧光定量PCR方法的建立 | 第42-45页 |
| ·pMD-gB阳性标准品结果 | 第42页 |
| ·PRV荧光定量PCR反应的条件 | 第42-43页 |
| ·PRV荧光定量PCR检测极限的测定和标准曲线的建立 | 第43-44页 |
| ·特异性和重复性检测 | 第44页 |
| ·与普通PCR检测方法的对比及对临床样品的检测 | 第44-45页 |
| ·伪狂犬病毒gB抗原表位基因Pichia酵母表达载体的构建及其表达 | 第45-48页 |
| ·含酶切位点引物对伪狂犬病毒gB全基因的扩增与纯化 | 第45-46页 |
| ·重组表达质粒pPICZα-gB的构建 | 第46页 |
| ·伪狂犬病毒gB基因在Pichia酵母中的表达 | 第46-47页 |
| ·伪狂犬病毒gB基因在Picha酵母中的表达 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白表达条件的优化 | 第48页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第48页 |
| ·伪狂犬病毒gB抗原表位基因蛋白表达的初步应用 | 第48-52页 |
| ·gB重组蛋白间接ELISA方法的确立 | 第48-52页 |
| ·重组蛋白免疫效果的检测 | 第52页 |
| ·伪狂犬病毒gB基因抗血清的制备 | 第52页 |
| 4 讨论 | 第52-56页 |
| ·伪狂犬病毒分离株的分子生物学鉴定 | 第52-53页 |
| ·伪狂犬病毒gB基因荧光定量PCR方法的建立 | 第53页 |
| ·伪狂犬病毒gB抗原表位基因Pichia酵母表达载体的构建及其表达 | 第53-54页 |
| ·Pichia酵母表达系统的选择 | 第53-54页 |
| ·重组蛋白抗原表位分析鉴定 | 第54页 |
| ·伪狂犬病毒gB抗原表位基因蛋白表达的初步应用 | 第54-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第64页 |
