| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 符号说明 | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1. 肌内脂肪与肉质 | 第13页 |
| 2. 过氧化物酶体激活增殖受体基因概述 | 第13-17页 |
| ·过氧化物酶体激活增殖受体基因的发现 | 第13-14页 |
| ·PPAR的结构 | 第14-15页 |
| ·PPARs基因的分类及生物学功能 | 第15-17页 |
| 3. PPARγ的研究现状 | 第17-20页 |
| ·PPARγ与肉质关系的研究 | 第17-18页 |
| ·PPARγ与脂肪细胞分化的研究 | 第18-19页 |
| ·PPARγ与脂肪代谢关系的研究 | 第19-20页 |
| 4. 转基因动物的制备 | 第20-21页 |
| 5. 本研究的目的及意义 | 第21-23页 |
| 第二章 PPARγ基因的克隆、序列分析及 #21重组真核表达载体构建 | 第23-33页 |
| 1. 材料与方法 | 第23-27页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·实验对象 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·引物设计与合成 | 第24页 |
| ·其他常用试剂配制 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-27页 |
| ·脂肪组织总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·PPARγ基因cDNA的合成及扩增 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·PPARγ基因的T-A克隆 | 第25-26页 |
| ·重组质粒pEGFP-PPARγ的构建及鉴定 | 第26页 |
| ·PPARγ基因编码区(CDS)的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 2. 结果 | 第27-31页 |
| ·PPARγ基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·重组表达载体pEGFP-PPARγ的鉴定 | 第28-29页 |
| ·PPARγ生物信息学分析结果 | 第29-31页 |
| ·cDNA序列分析 | 第29页 |
| ·徐淮山羊与其他动物PPARγ cDNA序列同源性比较 | 第29页 |
| ·徐淮山羊与其他动物PPARγ氨基酸序列的遗传进化分析 | 第29-31页 |
| ·PPARγ蛋白结构分析 | 第31页 |
| 3. 分析与讨论 | 第31-32页 |
| 4. 结论 | 第32-33页 |
| 第三章 体外重组PPARγ基因的表达及 #31其亚细胞定位研究 | 第33-41页 |
| 1. 材料和方法 | 第33-36页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·实验对象 | 第33页 |
| ·仪器设备 | 第33-34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·其他常用试剂配制 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-36页 |
| ·PPARγ蛋白亚细胞定位预测 | 第34页 |
| ·重组质粒pEGFP-PPARγ转染NIH-3T3细胞 | 第34-35页 |
| ·目的基因在NIH-3T3细胞中mRNA表达检测 | 第35页 |
| ·目的基因在NIH-3T3细胞中蛋白表达检测 | 第35-36页 |
| 2. 结果 | 第36-39页 |
| ·PPARγ蛋白亚细胞定位预测结果 | 第36-37页 |
| ·质粒转染NIH-3T3细胞的检测结果 | 第37页 |
| ·RT-PCR检测蛋白的初步表达 | 第37-38页 |
| ·EGFP-PPARγ融合蛋白在NIH-3T3中的表达 | 第38-39页 |
| 3. 分析与讨论 | 第39-40页 |
| 4. 结论 | 第40-41页 |
| 第四章 PPARγ基因表达诱导NIH-3T3 #39成纤维细胞向脂肪细胞分化研究 | 第41-48页 |
| 1. 材料和方法 | 第41-44页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·实验对象 | 第41-42页 |
| ·仪器设备 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·其他试剂的配制 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-44页 |
| ·NIH-3T3细胞对G418敏感性实验 | 第42页 |
| ·pEGFP-PPARγ转染NIH-3T3细胞 | 第42页 |
| ·阳性细胞筛选 | 第42-43页 |
| ·稳定转染pEGFP-PPARγ的NIH-3T3细胞诱导分化 | 第43页 |
| ·脂肪细胞鉴定 | 第43-44页 |
| 2. 结果 | 第44-46页 |
| ·NIH-3T3对不同浓度G418毒性的敏感性 | 第44页 |
| ·细胞转染后筛选 | 第44页 |
| ·稳定转染的NIH-3T3细胞诱导分化结果 | 第44-46页 |
| ·显微镜下诱导分化细胞的形态变化 | 第44-45页 |
| ·脂肪细胞的油红O染色鉴定 | 第45页 |
| ·RT-PCR检测细胞中基因的表达 | 第45-46页 |
| 3. 分析与讨论 | 第46-47页 |
| 4. 结论 | 第47-48页 |
| 第五章 携带PPARγ转基因绵羊的制备 | 第48-58页 |
| 1. 材料和方法 | 第49-52页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·实验动物 | 第49页 |
| ·实验器材 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·其他主要试剂配制 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-52页 |
| ·pEGFP-PPARγ线性化质粒制备 | 第49-50页 |
| ·脂质体转染液的制备及睾丸内注射质粒 | 第50页 |
| ·F_1代羔羊基因整合的检测 | 第50-52页 |
| ·F_1代羔羊基因组DNA PCR检测 | 第50-51页 |
| ·F_1代羔羊基因组DNA点杂交检测 | 第51页 |
| ·F_1代羔羊组织蛋白Western blot检测 | 第51-52页 |
| 2. 结果 | 第52-55页 |
| ·pEGFP-PPARγ质粒提取及线性化 | 第52页 |
| ·F_1代羔羊基因组DNA PCR检测结果 | 第52-54页 |
| ·F_1代羔羊基因组DNA点杂交检测结果 | 第54页 |
| ·F_1代羔羊组织蛋白质Western blot检测结果 | 第54-55页 |
| 3. 分析与讨论 | 第55-57页 |
| ·脂质体在睾丸注射时的作用 | 第55-56页 |
| ·睾丸注射法制备转基因绵羊 | 第56-57页 |
| ·睾丸注射法的可行性 | 第56页 |
| ·睾丸注射法制备转基因绵羊的效率 | 第56-57页 |
| 4. 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第67-68页 |
