| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 引言 | 第9页 |
| 1 文献综述 | 第9-18页 |
| ·Pax家族概述 | 第9-10页 |
| ·Pax5基因与其蛋白结构功能概述 | 第10-12页 |
| ·Pax5调控早期B细胞定向分化发育 | 第12-14页 |
| ·Pax5在血系恶性肿瘤中的表达 | 第14-15页 |
| ·复制缺陷型逆转录病毒载体介导的RNAi简介 | 第15-17页 |
| ·问题与展望 | 第17-18页 |
| 2 Pax5的原核表达、纯化以及多克隆抗体制备 | 第18-37页 |
| ·材料与方法 | 第18-30页 |
| ·仪器设备 | 第18-19页 |
| ·试剂与配置 | 第19-21页 |
| ·Pax5基因的扩增 | 第21-23页 |
| ·PCR产物与T载体连接与测序 | 第23-24页 |
| ·Pax5基因与pET28a表达载体的连接构建与鉴定 | 第24-26页 |
| ·pET28a-Pax5转化BL21并由IPTG诱导表达 | 第26页 |
| ·表达产物的纯化及Western blot分析 | 第26-27页 |
| ·兔抗Pax5蛋白多克隆抗体制备 | 第27-29页 |
| ·Pax5多克隆抗体对Raji细胞Pax5蛋白的Western blot检测 | 第29-30页 |
| ·Pax5多克隆抗体对Raji细胞中Pax5蛋白的免疫荧光检测 | 第30页 |
| ·结果 | 第30-35页 |
| ·Pax5基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·重组pET28a-Pax5载体的构建及鉴定 | 第31-32页 |
| ·融合蛋白Pax5在BL21大肠杆菌中的诱导表达及纯化 | 第32-33页 |
| ·纯化Pax5 Western blot分析 | 第33页 |
| ·间接ELISA测抗血清中Pax5抗体效价 | 第33-34页 |
| ·Pax5多克隆抗体对Raji细胞Pax5蛋白的Western blot检测 | 第34-35页 |
| ·Pax5多克隆抗体对Raji细胞Pax5蛋白的免疫荧光检测 | 第35页 |
| ·小结 | 第35-37页 |
| 3 70z/3 细胞Pax5基因沉默细胞模型的建立 | 第37-54页 |
| ·材料与方法 | 第37-49页 |
| ·仪器和试剂 | 第37-38页 |
| ·试剂与配置 | 第38-39页 |
| ·最佳干扰序列的筛选 | 第39-43页 |
| ·Oligo DNA的准备 | 第43页 |
| ·pSINsi-hU6/Pax5-siRNA逆转录病毒载体构建与鉴定 | 第43-45页 |
| ·重组逆转录病毒的包装及准备 | 第45-46页 |
| ·70z/3细胞Pax5基因沉默细胞模型的建立 | 第46-47页 |
| ·早期B细胞特异性基因表达量的RT-PCR检测 | 第47-49页 |
| ·实验结果 | 第49-52页 |
| ·最佳干扰序列的筛选 | 第49页 |
| ·pSINsi-hU6/Pax5-siRNA逆转录病毒载体构建鉴定 | 第49-50页 |
| ·70z/3细胞Pax5基因沉默细胞模型建立 | 第50-51页 |
| ·早期B细胞特异性基因表达量的检测 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录A 缩略语 | 第61-62页 |
| 附录B 谱图 | 第62-63页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
