| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-29页 |
| ·海藻糖及其理化性质 | 第13-15页 |
| ·海藻糖的发现及其化学结构 | 第13-14页 |
| ·海藻糖的物理化学性质 | 第14-15页 |
| ·海藻糖的生物学保护机理 | 第15-16页 |
| ·“稳定态” | 第15页 |
| ·“优先排阻” | 第15-16页 |
| ·“玻璃态” | 第16页 |
| ·“水替代” | 第16页 |
| ·海藻糖的生物学功能 | 第16-18页 |
| ·生物体的结构组分 | 第16-17页 |
| ·贮存碳源和提供能量的物质 | 第17页 |
| ·生物大分子的稳定剂和保护剂 | 第17-18页 |
| ·海藻糖的检测 | 第18-20页 |
| ·薄层层析(TLC) | 第19页 |
| ·纸层析(PC) | 第19页 |
| ·高效液相色谱(HPLC) | 第19页 |
| ·蒽酮比色法 | 第19页 |
| ·气相色谱(GC) | 第19-20页 |
| ·酶法 | 第20页 |
| ·海藻糖的生产方法 | 第20-24页 |
| ·天然微生物抽提法 | 第20-21页 |
| ·微生物发酵法 | 第21页 |
| ·化学合成法制备海藻糖 | 第21页 |
| ·海藻糖的酶法转化 | 第21-23页 |
| ·基因工程法生产海藻糖 | 第23-24页 |
| ·海藻糖的应用 | 第24-27页 |
| ·在食品行业的应用 | 第24-26页 |
| ·在医药行业的应用 | 第26页 |
| ·在化妆品行业的应用 | 第26页 |
| ·在农业方面的应用 | 第26-27页 |
| ·本课题的立题背景和研究内容 | 第27-29页 |
| ·立题背景 | 第27页 |
| ·主要研究内容 | 第27-29页 |
| 第2章 Pseudomonas putida P06 培养特性及分类鉴定 | 第29-47页 |
| ·引言 | 第29页 |
| ·材料和方法 | 第29-31页 |
| ·实验菌株 | 第29页 |
| ·分子试剂 | 第29页 |
| ·化学试剂 | 第29-30页 |
| ·主要实验仪器 | 第30页 |
| ·主要培养基 | 第30-31页 |
| ·试剂的配制方法 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-38页 |
| ·菌体形态特征观察 | 第31-32页 |
| ·平板培养特征观察 | 第32页 |
| ·运动性实验 | 第32页 |
| ·基本生理生化实验 | 第32页 |
| ·P06 生长曲线的测定 | 第32页 |
| ·细菌培养方法 | 第32-33页 |
| ·粗酶液的制备方法 | 第33页 |
| ·酶活力测定及海藻糖含量检测 | 第33页 |
| ·超声破碎细胞 | 第33-34页 |
| ·菌体量的测定 | 第34页 |
| ·海藻糖的检测方法 | 第34-36页 |
| ·Pseudomonas putida P06 基因组 DNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·16S rDNA 基因的 PCR 扩增与鉴定 | 第37-38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-45页 |
| ·P06 细胞形态 | 第38-39页 |
| ·P06 菌落形态 | 第39页 |
| ·运动性实验 | 第39-40页 |
| ·P06 菌株的生理生化实验结果 | 第40页 |
| ·P06 的生长曲线测定 | 第40-41页 |
| ·P06 的产酶实验结果 | 第41-43页 |
| ·菌株 P06 的 16S rDNA 序列及进化树分析 | 第43-45页 |
| ·本章小结 | 第45-47页 |
| 第3章 恶臭假单胞菌 P06 海藻糖合成酶基因的克隆与表达 | 第47-67页 |
| ·引言 | 第47页 |
| ·实验材料 | 第47-51页 |
| ·菌株与质粒 | 第47-48页 |
| ·引物合成 | 第48页 |
| ·试剂盒与工具酶 | 第48页 |
| ·生化试剂 | 第48-49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·培养基配制方法、培养条件及诱导条件 | 第49-50页 |
| ·常用溶液的配方 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-57页 |
| ·Pseudomonas putida P06 基因组 DNA 的提取 | 第51页 |
| ·PCR 引物的设计 | 第51-53页 |
| ·目的 DNA 片段的回收 | 第53页 |
| ·目的片段与载体的酶切 | 第53-54页 |
| ·目的片段与 pET-15b 载体的链接 | 第54页 |
| ·E.coli BL21（DE3）感受态的制备 | 第54页 |
| ·转化大肠杆菌 BL21（DE3） | 第54-55页 |
| ·小量质粒提取方法 | 第55页 |
| ·重组克隆的验证 | 第55-57页 |
| ·阳性克隆的诱导与蛋白的表达检验 | 第57页 |
| ·实验结果分析 | 第57-65页 |
| ·P06 Tres 基因的 PCR 扩增与载体的构建 | 第57-60页 |
| ·重组子的验证 | 第60-61页 |
| ·P06 菌株 Tres 基因测序分析结果 | 第61-63页 |
| ·重组菌海藻糖合酶的诱导表达及蛋白质电泳分析结果 | 第63-64页 |
| ·海藻糖的测定分析 | 第64-65页 |
| ·本章小结 | 第65-67页 |
| 第4章 重组 E.coli BL21（DE3）的培养及条件优化 | 第67-85页 |
| ·引言 | 第67页 |
| ·实验材料和仪器设备 | 第67-68页 |
| ·菌种 | 第67页 |
| ·培养基 | 第67-68页 |
| ·主要仪器设备： | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-74页 |
| ·重组菌的稳定性测试 | 第68-69页 |
| ·摇瓶培养方式 | 第69页 |
| ·5 L 发酵罐培养方式 | 第69-70页 |
| ·诱导条件的优化 | 第70-72页 |
| ·酶反应条件的优化 | 第72-73页 |
| ·菌体量的测定 | 第73页 |
| ·粗酶液的制备方法 | 第73页 |
| ·酶活力测定及海藻糖含量检测 | 第73-74页 |
| ·实验结果与讨论 | 第74-80页 |
| ·重组菌遗传稳定性的测试 | 第74页 |
| ·基因工程菌摇瓶培养生长曲线 | 第74-75页 |
| ·诱导条件的优化结果 | 第75-77页 |
| ·酶反应条件的优化结果 | 第77-80页 |
| ·最优条件下的海藻糖含量检测 | 第80页 |
| ·台式 5L 发酵罐高密度培养工程菌条件的初步探讨 | 第80-83页 |
| ·诱导剂的种类选定 | 第80-81页 |
| ·台式 5L 发酵罐的诱导条件 | 第81页 |
| ·台式 5L 发酵罐培养过程研究 | 第81-83页 |
| ·本章小结 | 第83-85页 |
| 第五章 结论与展望 | 第85-89页 |
| ·主要结论 | 第85-86页 |
| ·课题展望 | 第86-89页 |
| 参考文献 | 第89-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第95页 |
