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东北红豆杉悬浮细胞与内生真菌在紫杉醇合成中相互关系的研究

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-11页
第一章 绪论第11-26页
   ·紫杉醇化学结构及理化性质第11页
   ·紫杉醇作用机理及构效关系第11-12页
     ·紫杉醇的抗癌机理第11页
     ·紫杉醇的构效关系第11-12页
   ·紫杉醇的生化合成途径第12页
     ·紫杉醇合成的生化途径第12页
   ·紫杉醇生产方法的研究现状第12-15页
     ·化学合成法第12-13页
     ·人工栽培与半合成法第13-14页
     ·植物细胞悬浮培养法第14页
     ·微生物发酵法第14-15页
   ·提高植物细胞悬浮培养中紫杉醇含量的方法第15-19页
     ·筛选高通量植物细胞株第15页
     ·前体饲喂第15-16页
     ·添加抑制剂第16页
     ·添加诱导子第16-17页
     ·优化培养条件和培养环境第17-18页
     ·培养方式第18-19页
     ·采用新型生物反应器第19页
   ·植物防御反应及在植物细胞悬浮培养中的应用第19-23页
     ·植物细胞的防御反应与植物次生代谢物的合成第19-20页
     ·防御反应与诱导子第20-21页
     ·红豆杉悬浮细胞防御反应中常见的生理反应及与紫杉醇合成的关系第21-23页
   ·红豆杉与内生真菌第23-24页
   ·本文的研究意义及主要研究内容第24-26页
第二章 内生真菌对东北红豆杉悬浮细胞生物学特性与紫杉醇合成的影响第26-40页
   ·前言第26-27页
   ·实验材料与仪器第27-28页
     ·仪器设备第27页
     ·实验试剂第27页
     ·培养基第27-28页
     ·生物材料第28页
   ·方法第28-31页
     ·内生真菌培养液的制备(Fungal endophyte culture supernatant, FECS)第28页
     ·植物悬浮细胞的培养及处理第28-29页
     ·植物细胞生长及活性的测定第29页
     ·总糖的测定第29页
     ·苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia-lyase, PAL)的测定第29页
     ·总酚测定第29-30页
     ·紫杉烷的提取第30页
     ·紫杉烷的测定第30-31页
     ·数据统计分析第31页
   ·结果与讨论第31-39页
     ·内生真菌培养液(FECS)对东北红豆杉细胞生长的影响第31-32页
     ·内生真菌培养液(FECS)对东北红豆杉细胞活性的影响第32-33页
     ·内生真菌培养液(FECS)对东北红豆杉细胞防御反应的影响第33-35页
     ·内生真菌培养液(FECS)对东北红豆杉细胞合成紫杉醇的影响第35-36页
     ·不同培养条件下的FECS 对东北红豆杉细胞紫杉醇合成的影响第36-37页
     ·内生真菌培养液(FECS)对东北红豆杉细胞紫杉烷积累的影响第37-39页
   ·本章总结第39-40页
第三章 内生真菌影响东北红豆杉细胞生长和紫杉醇合成的有效成分的分离与鉴定第40-52页
   ·前言第40页
   ·实验设备与实验材料第40-41页
     ·实验设备第40-41页
     ·实验试剂第41页
     ·培养基第41页
     ·生物材料第41页
   ·方法第41-43页
     ·内生真菌培养液的制备(Fungal endophyte culture supernatant, FECS)第41页
     ·内生真菌培养液(FECS)各组分的分离第41页
     ·植物悬浮细胞的培养、处理及生长测定第41页
     ·真菌胞外多糖(EPS)分子量的测定第41-42页
     ·真菌胞外多糖(EPS)单糖组成测定第42页
     ·内生真菌培养液(FECS)中赤霉素(GA3)的提取第42-43页
     ·内生真菌培养液(FECS)中赤霉素(GA3)的测定第43页
     ·苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia-lyase, PAL)的测定第43页
     ·紫杉醇的测定第43页
     ·数据统计分析第43页
   ·结果与讨论第43-51页
     ·内生真菌培养液(FECS)活性成分的初步分析第43-44页
     ·内生真菌培养液(FECS)中的植物激素分析第44-46页
     ·内生真菌胞外多糖(EPS)及其化学组成分析第46-48页
     ·内生真菌培养条件对其活性成分的影响第48-50页
     ·多糖和FECS 在紫杉醇合成中的关系第50-51页
   ·本章总结第51-52页
第四章 内生真菌培养液与茉莉酸甲酯(MJ)诱导子的比较第52-59页
   ·前言第52页
   ·实验仪器与材料第52页
     ·仪器设备第52页
     ·实验试剂第52页
     ·培养基第52页
     ·生物材料第52页
   ·方法第52-53页
     ·内生真菌培养液的制备(Fungal endophyte culture supernatant, FECS)第52页
     ·植物悬浮细胞的培养及处理第52-53页
     ·植物细胞生长测定第53页
     ·植物细胞活性的测定第53页
     ·植物细胞内脱落酸(Abscisic acid, ABA)的提取第53页
     ·脱落酸(ABA)的测定第53页
     ·紫杉醇的测定第53页
     ·数据处理与统计分析第53页
   ·结果与讨论第53-57页
     ·内生真菌培养液和茉莉酸甲酯对东北红豆杉细胞生长的影响第53-54页
     ·内生真菌培养液和茉莉酸甲酯对东北红豆杉细胞活力的影响第54-55页
     ·内生真菌培养液和茉莉酸甲酯对东北红豆杉细胞内源脱落酸的影响第55-56页
     ·内生真菌培养液和茉莉酸甲酯对东北红豆杉细胞紫杉醇合成影响比较第56-57页
     ·内生真菌培养液处理和茉莉酸甲酯处理东北红豆杉细胞紫杉醇烷的积累分析第57页
   ·本章小结第57-59页
第五章 红豆杉细胞对内生真菌生长及紫杉醇合成的影响第59-65页
   ·前言第59页
   ·仪器与实验材料第59-60页
     ·仪器设备第59页
     ·实验试剂第59页
     ·培养基第59-60页
     ·生物材料第60页
   ·方法第60-61页
     ·东北红豆杉细胞悬浮培养及美丽镰刀菌的培养第60页
     ·美丽镰刀菌生长的测定第60页
     ·美丽镰刀菌培养液总糖的测定第60页
     ·美丽镰刀菌培养液紫杉醇的提取与测定第60页
     ·数据处理与统计分析第60-61页
   ·结果与讨论第61-64页
     ·东北红豆杉细胞培养液对美丽镰刀菌生长的影响第61页
     ·不同培养阶段东北红豆杉细胞培养液对美丽镰刀菌生长的影响第61-63页
     ·东北红豆杉细胞液的添加时间第63页
     ·东北红豆杉细胞对美丽镰刀菌合成紫杉醇的影响第63-64页
   ·本章小结第64-65页
第六章 内生真菌与东北红豆杉细胞的耦合培养第65-74页
   ·前言第65页
   ·实验仪器与材料第65-67页
     ·实验仪器第65-66页
     ·实验试剂第66页
     ·培养基第66-67页
   ·方法第67-68页
     ·植物细胞与内生真菌的种子培养第67页
     ·内生真菌与东北红豆杉细胞的耦合培养第67-68页
     ·紫杉醇测定第68页
     ·总酚测定第68页
     ·植物细胞生长与真菌生长测定第68页
     ·数据处理与统计分析第68页
   ·结果与讨论第68-73页
     ·耦合培养与非耦合培养东北红豆杉细胞的生长与紫杉醇的合成第68-70页
     ·培养基对耦合培养中紫杉醇合成的影响第70-71页
     ·中央隔膜对东北红豆杉细胞生长与紫杉醇合成的影响第71页
     ·耦合培养中真菌的通气流量第71-72页
     ·内生真菌的接种时间第72-73页
   ·本章小结第73-74页
结论与展望第74-76页
参考文献第76-88页
附录1:论文创新点第88-89页
附录2:作者在攻读博士学位期间发表的论文与参加科研情况第89-90页
附录3:缩写表第90-91页
致谢第91页

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