| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-31页 |
| ·立题背景和意义 | 第12-13页 |
| ·国内外研究现状与进展 | 第13-21页 |
| ·木霉产纤维素酶的结构与功能关系研究 | 第13-16页 |
| ·具有水解壳聚糖和纤维素降解活性的双功能酶的结构与功能研究 | 第16-19页 |
| ·纤维素酶和壳聚糖酶基因中的可变剪接现象及其与功能性质关系的研究 | 第19-21页 |
| ·本论文的研究目标和内容 | 第21-22页 |
| ·研究目标 | 第21页 |
| ·研究内容 | 第21-22页 |
| ·研究路线 | 第22页 |
| 参考文献 | 第22-31页 |
| 第二章 绿色木霉发酵产双功能酶的研究 | 第31-56页 |
| ·前言 | 第31页 |
| ·材料与试剂 | 第31-32页 |
| ·菌株 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31-32页 |
| ·主要材料 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-36页 |
| ·壳聚糖脱乙酰度(DD)的测定 | 第32页 |
| ·壳聚糖酶粘均分子量的测定 | 第32页 |
| ·绿色木霉的发酵产酶 | 第32-33页 |
| ·酶活力检测方法 | 第33页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第33页 |
| ·绿色木霉产降解壳聚糖活性酶组分的分离纯化 | 第33-34页 |
| ·双功能酶的纯度鉴定及分子量测定 | 第34页 |
| ·纯化酶的酶学性质测定 | 第34-35页 |
| ·双功能酶的水解产物分析 | 第35-36页 |
| ·CCBE 的质谱测序分析 | 第36页 |
| ·CCBE 催化必需羧基基团的确定 | 第36页 |
| ·CCBE 的傅立叶变换红外光谱(FT-IR)分析 | 第36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-52页 |
| ·T.viride 发酵产酶条件确定 | 第36-37页 |
| ·绿色木霉产双功能酶的纯化 | 第37-40页 |
| ·酶组分的纯度鉴定和分子量确定 | 第40-41页 |
| ·绿色木霉产双功能酶的酶学性质分析 | 第41-44页 |
| ·CCBE 水解产物分析 | 第44-48页 |
| ·CCBE 的质谱测序分析 | 第48-49页 |
| ·CCBE 的催化必需羧基基团的确定 | 第49-51页 |
| ·CCBE 的 FT-IR 分析 | 第51-52页 |
| ·本章小结 | 第52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 第三章 绿色木霉产双功能酶的基因克隆及其在真核毕赤酵母系统中的表达 | 第56-79页 |
| ·前言 | 第56页 |
| ·材料与试剂 | 第56-57页 |
| ·菌株、质粒及实验动物 | 第56页 |
| ·培养基 | 第56-57页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·试剂配制 | 第57页 |
| ·试验方法 | 第57-62页 |
| ·T.viride 的培养 | 第57-58页 |
| ·绿色木霉 RNA 的提取 | 第58页 |
| ·绿色木霉基因组 DNA 的提取 | 第58页 |
| ·RT-PCR 法扩增 CCBE 的 cDNA 片段 | 第58页 |
| ·CCBE 的全长 cDNA 序列的克隆 | 第58-60页 |
| ·CCBE 的 DNA 序列扩增 | 第60页 |
| ·CCBE 基因的克隆 | 第60页 |
| ·全长序列的生物信息学分析 | 第60页 |
| ·CCBE 基因在毕赤酵母中的表达 | 第60-62页 |
| ·酶活测定 | 第62页 |
| ·SDS-PAGE 及 Western Blot 分析 | 第62页 |
| ·实验结果与讨论 | 第62-76页 |
| ·RNA 和 DNA 提取 | 第62-63页 |
| ·CCBE 的全长 cDNA 序列及 DNA 序列的克隆 | 第63-68页 |
| ·CCBE 推导的氨基酸序列分析及同源性比较 | 第68-71页 |
| ·CCBE 含有内含子的成熟肽基因在毕赤酵母中的表达 | 第71-75页 |
| ·重组酶DC的 SDS-PAGE 和 Western blot 分析 | 第75-76页 |
| ·小结 | 第76页 |
| 参考文献 | 第76-79页 |
| 第四章 绿色木霉产双功能酶的基因结构对其双功能活性的调控 | 第79-104页 |
| ·前言 | 第79-80页 |
| ·材料与试剂 | 第80页 |
| ·菌株与质粒 | 第80页 |
| ·培养基 | 第80页 |
| ·试剂 | 第80页 |
| ·实验方法 | 第80-83页 |
| ·不同诱导时间 T.viride 的 CCBE 基因的差异表达 | 第80-81页 |
| ·各剪接子的体外装配 | 第81-82页 |
| ·各剪接子基因的克隆 | 第82页 |
| ·各剪接子表达载体的构建 | 第82页 |
| ·各剪接子重组毕赤酵母的筛选鉴定 | 第82页 |
| ·各剪接子重组毕赤酵母的诱导表达 | 第82页 |
| ·各剪接子重组毕赤酵母总 RNA 的提取 | 第82-83页 |
| ·各剪接子重组表达产物的 SDS-PAGE 和 Western blot | 第83页 |
| ·各重组剪接子表达产物的酶活力分析 | 第83页 |
| ·各剪接重组子表达产物的纯化 | 第83页 |
| ·各剪接子重组酶的酶学性质分析比较 | 第83页 |
| ·C-末端 CBD 缺失分析 | 第83页 |
| ·结果与讨论 | 第83-100页 |
| ·不同诱导时间绿色木霉 CCBE 的 mRNA 表达差异分析 | 第83-84页 |
| ·CCBE 不同剪接体的体外组装 | 第84-86页 |
| ·CCBE 三个剪接子重组表达载体的构建 | 第86-87页 |
| ·不同剪接子基因与毕赤酵母染色体的整合 | 第87页 |
| ·不同 CCBE 剪接子基因在毕赤酵母中的诱导表达 | 第87-89页 |
| ·各种重组毕赤酵母的转录产物分析 | 第89页 |
| ·各种剪接子重组酶的纯化及酶学性质分析 | 第89-94页 |
| ·不同剪接重组酶水解产物的 TLC 分析 | 第94-96页 |
| ·不同剪接重组酶水解产物的 HPLC 分析 | 第96-99页 |
| ·不同剪接重组酶水解 CMC 的产物分析 | 第99页 |
| ·去除 C-末端 CBD 区域的突变酶表达分析 | 第99-100页 |
| ·小结 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-104页 |
| 主要结论 | 第104-105页 |
| 创新点 | 第105-106页 |
| 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
