| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-16页 |
| ·内质网应激反应的概述 | 第12-13页 |
| ·产生ER Stress的原因 | 第12页 |
| ·ER Stress的适应性表现 | 第12-13页 |
| ·内质网中的蛋白质折叠和质量控制 | 第13-14页 |
| ·未折叠蛋白反应 | 第14-15页 |
| ·GRP78对UPR感受分子的调控 | 第14页 |
| ·PERK磷酸化eIF2α以缓解mRNA的翻译 | 第14-15页 |
| ·IRE1途径 | 第15页 |
| ·ATF6介导的转录激活 | 第15页 |
| ·ER Stress诱导的细胞凋亡 | 第15-16页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 第3章 材料与方法 | 第17-27页 |
| ·试验材料 | 第17-20页 |
| ·细胞与菌株 | 第17页 |
| ·载体与质粒 | 第17-18页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第18页 |
| ·培养基与抗生素及其配制 | 第18-19页 |
| ·刺激物 | 第19页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第20页 |
| ·连接产物的转化 | 第20页 |
| ·质粒的制备与鉴定 | 第20-21页 |
| ·质粒转染(Lipofectamine 2000介导的转染法) | 第21-22页 |
| ·双荧光素酶检测实验 | 第22页 |
| ·细胞、感染病毒的细胞样品总RNA的提取 | 第22-23页 |
| ·PCR产物纯化 | 第23页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第23-24页 |
| ·MicroRNA芯片检测 | 第24页 |
| ·MicroRNA靶标的预测 | 第24页 |
| ·SYBR GreenⅠ实时定量PCR | 第24-25页 |
| ·本研究中所用到的PCR引物 | 第25-26页 |
| ·统计学方法 | 第26-27页 |
| 第4章 结果和分析 | 第27-36页 |
| ·MicroRNA基因芯片筛选内质网应激时发生变化的MicroRNA | 第27页 |
| ·SYBR Green实时定量PCR检测microRNA相对表达量的方法 | 第27-30页 |
| ·检测microRNA SYBR Green实时定量PCR标准曲线的斜率 | 第27-28页 |
| ·MicroRNA和U6 SYBR Green实时定量PCR产物熔解曲线的绘制 | 第28-30页 |
| ·SYBR Green实时定量PCR验证内质网应激上调miR-148a | 第30-31页 |
| ·SYBR Green实时定量PCR验证MicroRNA基因芯片结果 | 第30页 |
| ·miR-148a的表达量随着内置网应激程度而增加 | 第30-31页 |
| ·miR-148a靶标基因的确定 | 第31-35页 |
| ·软件预测miR-148a和UPR相关的潜在靶标基因 | 第31页 |
| ·构建miR-148潜在靶标基因3’UTR的荧光素酶报告质粒 | 第31页 |
| ·MicroRNA模拟物实验验证miR-148a对潜在靶标的调控作用 | 第31-34页 |
| ·MicroRNA抑制剂实验验证miR-148a对PDIA3和CNX的调控作用 | 第34页 |
| ·突变种子序列抑制miR-148a对PDIA3的调控作用 | 第34-35页 |
| ·miR-148a、PDIA3和CNX在内质网应激过程中的变化关系 | 第35-36页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第36-38页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| ·SYBR Green实时定量PCR检测MicroRNA方法的可靠性 | 第36页 |
| ·miR-148a调控PDIA3和CNX的生物学功能 | 第36-37页 |
| ·结论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-44页 |
| 致谢 | 第44页 |
