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抗耻垢分枝杆菌的化学遗传学筛选方法的建立

摘要第1-13页
Abstract第13-15页
符号说明及縮写词第15-17页
第一章 文献综述第17-29页
   ·结核病与抗结核药物第17-22页
     ·结核病简介第17页
     ·抗结核药物研究进展第17-22页
       ·利福霉素类第17-18页
       ·氟喹诺酮类第18-19页
       ·硝基咪唑并吡喃类第19页
       ·氨基糖苷类第19-20页
       ·恶唑烷酮类第20页
       ·β-内酰胺类抗生素和β-内酰胺酶抑制剂复合物第20-21页
       ·吩噻嗪类第21页
       ·多肽类第21页
       ·新大环内酯类第21-22页
       ·脂肪酸和分枝菌酸合成抑制剂第22页
       ·二芳基喹啉类第22页
       ·异烟肼类第22页
   ·药物靶点筛选技术第22-27页
     ·比较基因组学第23-24页
     ·结构基因组学第24页
     ·功能基因组学第24-26页
       ·基因芯片第24-25页
       ·基因中断第25页
       ·反义核酸第25-26页
     ·蛋白质组学第26页
     ·化学基因组学第26-27页
   ·本论文研究思路第27-29页
第二章 实验部分第29-71页
   ·实验材料第29-33页
     ·菌株及质粒第29页
     ·培养基第29页
     ·试剂第29-32页
     ·仪器设备第32-33页
   ·实验方法第33-57页
     ·载体pEMAC的构建及稳定性第33-41页
       ·引物设计第34-35页
       ·oriM、aph(即Kan~r)片段的PCR扩增第35-36页
       ·pUC18载体、oriM片段及aph片段的酶切、连接第36-37页
       ·oriM-aph片段与pCC1FOS的连接第37-40页
       ·质粒pEMAC在M.smegmatis mc~2155内的稳定性验证第40-41页
     ·M.smegmatis mc~2155基因组文库(pEMAC)的构建第41-44页
       ·载体处理第41页
       ·M.smegmatis mc~2155基因组的提取第41-42页
       ·插入DNA的末端修复第42页
       ·末端修复DNA的分离第42-43页
       ·目的DNA片段的回收第43页
       ·连接第43-44页
       ·包装第44页
       ·感染第44页
       ·pEMAC文库质粒稳定性验证第44页
     ·pMINDcos1载体的构建及稳定性验证第44-48页
       ·引物设计第45页
       ·cos-MCS片段的PCR扩增第45-46页
       ·片段与载体的酶切、连接以及验证第46-47页
       ·pMINDcos1文库质粒稳定性预检测第47-48页
       ·质粒pMINDcos1在M.smegmatis mc~2155内的稳定性第48页
     ·M.smegmatis mc~2155基因组文库(pMINDcos1)的构建第48页
     ·M.smegmatis mc~2155基因组小片段文库(pMV261)的构建第48-50页
       ·M.smegmatis mc~2155基因组的部分酶切第48-49页
       ·载体pMV261的处理第49页
       ·连接及文库质量检验第49-50页
       ·小片段文库质粒在M.smegmatis mc~2155内的稳定性第50页
     ·其它针对质粒稳定性的实验第50-56页
       ·同源重组对质粒稳定性的影响第50-55页
       ·甲基化对质粒稳定性的影响第55页
       ·突变质粒转化M.smegmatis观察稳定性第55-56页
     ·靶点筛选第56-57页
       ·抗生素MIC值的测定第56页
       ·靶点筛选第56-57页
   ·实验结果第57-69页
     ·pEMAC载体及其文库质粒在M.smegmatis中不稳定第57-59页
     ·pMINDcos1文库质粒在M.smegmatis中不稳定第59-61页
     ·部分小片段文库质粒在M.smegmatis中不稳定第61-64页
     ·RecA基因的敲除第64-67页
     ·DNA甲基化与质粒不稳定无关第67-68页
     ·突变质粒再次转化M.smegmatis可保持稳定第68页
     ·靶点筛选第68-69页
   ·结论与讨论第69-71页
全文总结与展望第71-72页
附录第72-77页
参考文献第77-85页
致谢第85-86页
攻读硕士期间主要研究成果第86-87页
学位论文评阅及答辩情况表第87页

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