| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 文献综述 | 第12页 |
| 第一章 昆虫中肠氨肽酶N研究进展 | 第12-26页 |
| ·氨肽酶N的结构、特征及其分类地位 | 第13-14页 |
| ·氨肽酶N亚型分类及其基因特征 | 第14-16页 |
| ·APN1 | 第14-15页 |
| ·APN2 | 第15页 |
| ·APN3 | 第15页 |
| ·APN4 | 第15-16页 |
| ·APN5 | 第16页 |
| ·其他 APNs | 第16页 |
| ·不同APN同工酶在昆虫体内的分布及表达量 | 第16-17页 |
| ·氨肽酶N的基因功能验证 | 第17-18页 |
| ·细胞离体表达法 | 第17页 |
| ·转基因或RNAi技术活体验证 | 第17-18页 |
| ·昆虫Bt毒素受体蛋白 | 第18-24页 |
| ·受体蛋白 | 第18页 |
| ·昆虫受体蛋白氨肽酶N的结合动力学及其与Bt毒性的关系 | 第18-20页 |
| ·昆虫受体蛋白的变化与对Bt的抗性密切相关 | 第20-21页 |
| ·毒素受体蛋白APN的序列特征 | 第21-24页 |
| ·小结与展望 | 第24-26页 |
| 第二章 粉纹夜蛾中肠cDNA文库的构建 | 第26-36页 |
| ·材料 | 第26-28页 |
| ·粉纹夜蛾种群 | 第26页 |
| ·菌种及试剂 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·试剂及溶液的配制 | 第27-28页 |
| ·仪器设备 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-32页 |
| ·粉纹夜蛾中肠总RNA的提取 | 第28-29页 |
| ·cDNA的合成 | 第29-31页 |
| ·cDNA片段的大小分级及定量 | 第31页 |
| ·cDNA与载体λZAP的连接和体外包装 | 第31-32页 |
| ·原始 cDNA文库重组率和库容量检测 | 第32页 |
| ·cDNA文库的扩增 | 第32页 |
| ·cDNA文库的筛选 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-34页 |
| ·总RNA及mRNA的提取和纯化 | 第32-33页 |
| ·cDNA第一链和第二链的合成 | 第33-34页 |
| ·文库的容量及重组率 | 第34页 |
| ·文库质量的检测 | 第34页 |
| ·小结与讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 粉纹夜蛾中肠氨肽酶NAPN5和APN6基因的cDNA克隆与序列分析 | 第36-47页 |
| ·材料和试剂 | 第36-37页 |
| ·材料和试剂 | 第36-37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·仪器设备 | 第37页 |
| ·试验方法 | 第37-41页 |
| ·APN5和APN6基因克隆和测序引物 | 第37-38页 |
| ·cDNA文库质粒的甲基化 | 第38-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-44页 |
| ·overlapping primer PCR扩增及其纯化 | 第41页 |
| ·T3/T7、PW-456/T3、PW-457/T7PCR鉴定 | 第41页 |
| ·内切酶 PVUII 酶切验证 | 第41-44页 |
| ·序列结果与分析 | 第44页 |
| ·小结与讨论 | 第44-47页 |
| 第四章 氨肽酶 N 亚型在粉纹夜蛾不同组织的表达定位 | 第47-56页 |
| ·材料与方法 | 第47-51页 |
| ·粉纹夜蛾组织的准备 | 第47-48页 |
| ·试剂盒及试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器设备 | 第48页 |
| ·定量RT-PCR检测APN基因的表达研究方法 | 第48-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-54页 |
| ·APN引物设计及PCR条件优化 | 第51-52页 |
| ·粉纹夜蛾APN基因 6 个亚型的组织定位 | 第52-53页 |
| ·粉纹夜蛾不同发育期APN基因特异性表达测定 | 第53-54页 |
| ·小结与讨论 | 第54-56页 |
| 第五章 不同营养食物源对粉纹夜蛾幼虫中肠氨肽酶N活性及基因表达的影响 | 第56-68页 |
| ·材料与方法 | 第56-62页 |
| ·供试虫源 | 第56页 |
| ·主要仪器设备 | 第56-57页 |
| ·试虫处理方法及APN活性测定 | 第57-59页 |
| ·real time PCR检测不同营养饲料对粉纹夜蛾氨肽酶N基因表达的影响 | 第59-61页 |
| ·6个APN基因在不同组织表达的qRT-PCR检测 | 第61页 |
| ·数据分析 | 第61-62页 |
| ·结果与分析 | 第62-66页 |
| ·粉纹夜蛾氨肽酶N活性定位 | 第62-63页 |
| ·不同营养对粉纹夜蛾幼虫中肠氨肽酶活性的影响 | 第63-65页 |
| ·不同营养对粉纹夜蛾幼虫中肠APN亚型基因表达的影响 | 第65-66页 |
| ·小结与讨论 | 第66-68页 |
| ·氨肽酶家族APN在氨基酸代谢中起着主要的作用 | 第66页 |
| ·荧光实时定量PCR测定粉纹夜蛾APN基因相对表达水平 | 第66-68页 |
| 第六章 总结 | 第68-70页 |
| ·结论 | 第68-69页 |
| ·本论文的创新点 | 第69页 |
| ·有待进一步研究的问题 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 缩略词 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78-79页 |
