| 摘要 | 第1-16页 |
| Abstract | 第16-19页 |
| 第一章 根癌农杆菌介导的多年生黑麦草转化方法的建立 | 第19-58页 |
| 摘要 | 第20-21页 |
| 1.引言 | 第21-23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-39页 |
| ·试剂和缓冲液 | 第23-24页 |
| ·菌株和载体 | 第24-30页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30-32页 |
| ·细菌培养基 | 第30-31页 |
| ·植物培养基 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-37页 |
| ·质粒或连接产物转化大肠杆菌E.coli | 第32页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第32页 |
| ·质粒转化农杆菌 | 第32-35页 |
| ·愈伤组织的诱导、继代和分化培养 | 第35-37页 |
| ·根癌农杆菌的培养 | 第37页 |
| ·转化理化条件的确立 | 第37-39页 |
| ·愈伤组织的选取 | 第37页 |
| ·选择剂及选择压 | 第37页 |
| ·转化共培养时间 | 第37页 |
| ·菌株的选择 | 第37-38页 |
| ·除菌恢复培养 | 第38页 |
| ·质粒的选用 | 第38-39页 |
| 3.结果 | 第39-45页 |
| ·质粒转化农杆菌 | 第39页 |
| ·愈伤组织的诱导、分化及再生 | 第39-42页 |
| ·转化条件的优化 | 第42-45页 |
| ·菌株的选择 | 第42页 |
| ·选择剂及选择压的确立 | 第42-43页 |
| ·质粒的选择 | 第43页 |
| ·转化共培养时间的选择 | 第43-44页 |
| ·除菌恢复培养时间 | 第44-45页 |
| 4.讨论 | 第45-49页 |
| ·质粒转化根癌农杆菌方法的选择 | 第45页 |
| ·影响农杆菌介导的植物转化因素 | 第45-49页 |
| ·材料的选取 | 第45-46页 |
| ·愈伤组织的诱导和植株再生 | 第46页 |
| ·农杆菌菌株的选择 | 第46-47页 |
| ·选择剂、选择压和质粒的选择 | 第47-48页 |
| ·脱菌无选择培养 | 第48-49页 |
| 小结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-58页 |
| 第二章 多年生黑麦草(Lolium.perenne L.)遗传转化及转基因植株鉴定 | 第58-91页 |
| 摘要 | 第59-60页 |
| 1.引言 | 第60-62页 |
| 2.材料和方法 | 第62-69页 |
| ·质粒及菌株 | 第62页 |
| ·植物材料 | 第62页 |
| ·培养基 | 第62-63页 |
| ·植物组织培养 | 第63页 |
| ·多年生黑麦草愈伤组织诱导培养 | 第63页 |
| ·烟草无菌苗的培养 | 第63页 |
| ·转化方法 | 第63-65页 |
| ·转化程序 | 第63-64页 |
| ·转化技术路线 | 第64-65页 |
| ·转化子鉴定 | 第65-69页 |
| ·绿色荧光蛋白检测 | 第65页 |
| ·GUS组织化学显色反应 | 第65页 |
| ·PCR检测 | 第65-66页 |
| ·Southern-bloting检测 | 第66-68页 |
| ·Western-bloting检测 | 第68-69页 |
| 3.结果 | 第69-81页 |
| ·转化子筛选和转基因植株的获得 | 第69-72页 |
| ·转化子鉴定 | 第72-79页 |
| ·GUS组织染色 | 第72页 |
| ·GFP荧光体视显微镜检测 | 第72-74页 |
| ·PCR检测 | 第74-77页 |
| ·Southern-bloting分析 | 第77-78页 |
| 图2.16 转基因金牌美达丽植株的Southern-bloting分析 | 第78页 |
| ·Western-bloting分析 | 第78-79页 |
| ·转基因多年生黑麦草结果统计分析 | 第79-81页 |
| 4.讨论 | 第81-86页 |
| ·转化方法的建立 | 第81-82页 |
| ·报告基因gus和gfp | 第82页 |
| ·烟草汁及乙酰丁香酮对转化效率的影响 | 第82-83页 |
| ·报告基因的启动子对转化效率的影响 | 第83页 |
| ·转基因多年生黑麦草植株的分子鉴定 | 第83-84页 |
| ·转基因植株外源基因的整合位点 | 第84-86页 |
| 小结 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-91页 |
| 第三章 转基因多年生黑麦草植株T-DNA侧翼序列分析 | 第91-113页 |
| 摘要 | 第92-93页 |
| 1.引言 | 第93-94页 |
| 2.材料和方法 | 第94-98页 |
| ·植物总DNA提取 | 第94页 |
| ·Cassette-ligation-mediated PCR扩增T-DNA侧翼序列 | 第94-96页 |
| ·Cassette接头及引物合成 | 第94-95页 |
| ·DNA的限制性内切酶酶切反应 | 第95页 |
| ·Cassette-DNA连接反应 | 第95页 |
| ·PCR扩增 | 第95-96页 |
| ·PCR片段克隆和测序 | 第96-98页 |
| 3.结果 | 第98-105页 |
| ·特异引物设计 | 第98页 |
| ·侧翼序列克隆及测序 | 第98-100页 |
| ·T-DNA左侧翼序列分析 | 第100-105页 |
| 4.讨论 | 第105-108页 |
| ·未知侧翼序列扩增技术 | 第105页 |
| ·插入T-DNA边界序列分析 | 第105-106页 |
| ·插入基因组位点的分析 | 第106页 |
| ·T-DNA插入突变体在功能基因组研究中的应用 | 第106-108页 |
| 小结 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-113页 |
| 第四章 逆境诱导表达转录因子导入多年生黑麦草(Lolium perenne L.)研究 | 第113-143页 |
| 摘要 | 第114-115页 |
| 1.引言 | 第115-118页 |
| 2.材料和方法 | 第118-122页 |
| ·材料和试剂 | 第118页 |
| ·方法 | 第118-122页 |
| ·质粒构建 | 第118-121页 |
| ·多年生黑麦草遗传转化 | 第121页 |
| ·转化子鉴定 | 第121-122页 |
| 3.结果 | 第122-130页 |
| ·载体构建策略 | 第122-123页 |
| ·质粒p2325和p2326的构建及鉴定 | 第123-124页 |
| ·质粒p2327、p2328的构建和鉴定 | 第124-125页 |
| ·转基因植株的获得 | 第125-126页 |
| ·多福转基因植株鉴定 | 第126-127页 |
| ·PCR检测 | 第126页 |
| ·Southern-bloting分析 | 第126-127页 |
| ·转基因多福植株耐盐、抗旱生理测试 | 第127-130页 |
| ·耐盐生理测试 | 第127-129页 |
| ·干旱胁迫生理测试 | 第129-130页 |
| 4.讨论 | 第130-135页 |
| ·携转录因子DREB1B／TACBF1载体构建 | 第130-131页 |
| ·转外源目的基因植株的获得 | 第131页 |
| ·逆境诱导转录因子DREB1在转基因植物中的作用 | 第131-134页 |
| ·逆境胁迫诱导型基因的启动子 | 第134-135页 |
| 小结 | 第135-136页 |
| 参考文献 | 第136-143页 |
| 文献综述 植物生物技术在黑麦草遗传改良中的应用 | 第143-189页 |
| 1.概述 | 第144-150页 |
| ·生物技术在农业生产中的应用 | 第144-146页 |
| ·植物转基因技术 | 第146-149页 |
| ·间接遗传转化方法 | 第146-147页 |
| ·直接遗传转化方法 | 第147-149页 |
| ·黑麦草的生物学概况 | 第149-150页 |
| 2.生物技术在黑麦草研究中的应用 | 第150-160页 |
| ·组织培养 | 第150-152页 |
| ·分生组织培养 | 第150-151页 |
| ·愈伤组织培养和体细胞变异 | 第151-152页 |
| ·花药培养和单倍体的获得 | 第152页 |
| ·原生质体培养及植株再生 | 第152页 |
| ·细胞融合和体细胞杂种 | 第152页 |
| ·基因工程 | 第152-156页 |
| ·原生质体转化法 | 第152-153页 |
| ·碳化硅纤维介导转化法 | 第153页 |
| ·微粒轰击法 | 第153-155页 |
| ·农杆菌介导转化方法 | 第155-156页 |
| ·分子标记和数量性状基因定位 | 第156-160页 |
| ·分子标记 | 第156-158页 |
| ·数量性状基因的定位 | 第158-160页 |
| ·分子标记辅助育种 | 第160页 |
| 3.黑麦草转基因研究的主要目标 | 第160-167页 |
| ·品质改良 | 第160-161页 |
| ·提高病害抗性 | 第161-163页 |
| ·控制花粉致敏性 | 第163-164页 |
| ·抗除草剂品种的培育 | 第164页 |
| ·提高抗逆性 | 第164-166页 |
| ·生物反应器 | 第166-167页 |
| 4.RNA干扰技术及其在黑麦草遗传改良中的应用前景 | 第167-168页 |
| 5.基因功能和功能基因组的研究 | 第168-169页 |
| 6.转基因黑麦草的安全性 | 第169-170页 |
| 7.黑麦草遗传改良的意义 | 第170-172页 |
| 参考文献 | 第172-189页 |
| 致谢 | 第189-190页 |
| 在读期间发表或被接受的论文 | 第190-191页 |
