| 第一部分 重组人γ-干扰素高密度发酵放大工艺优化及复性研究 | 第1-98页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-34页 |
| 1．1 引言 | 第15-16页 |
| 1．2 干扰素概述 | 第16-18页 |
| 1．2．1 干扰素 | 第16-17页 |
| 1．2．2 干扰素研究概况 | 第17-18页 |
| 1．3 基因工程菌发酵条件的优化 | 第18-21页 |
| 1．3．1 培养基 | 第18-20页 |
| 1．3．2 培养条件 | 第20-21页 |
| 1．4 基因工程菌的高密度培养 | 第21-23页 |
| 1．4．1 重组大肠杆菌高密度培养概述 | 第21页 |
| 1．4．2 高密度发酵补料调控 | 第21-23页 |
| 1．5 基因工程药用蛋白的分离、纯化与复性 | 第23-30页 |
| 1．5．1 包含体的处理 | 第24-25页 |
| 1．5．2 重组蛋白的分离与纯化 | 第25页 |
| 1．5．3 重组蛋白的复性 | 第25-28页 |
| 1．5．4 IFN-γ的分离、纯化与复性 | 第28-30页 |
| 参考文献 | 第30-34页 |
| 第二章 重组大肠杆菌DH5α／pBV220发酵培养基的最优化研究 | 第34-46页 |
| 2．1 前言 | 第34-35页 |
| 2．2 材料与方法 | 第35-38页 |
| 2．2．1 菌种 | 第35页 |
| 2．2．2 培养基 | 第35页 |
| 2．2．3 培养方法 | 第35页 |
| 2．2．4 结果分析 | 第35-37页 |
| 2．2．5 试剂 | 第37-38页 |
| 2．3 不同培养基对工程菌生长和表达的影响 | 第38页 |
| 2．4 M_9培养基的优化 | 第38-44页 |
| 2．4．1 碳源优化 | 第38-40页 |
| 2．4．2 氮源优化 | 第40-43页 |
| 2．4．3 优化培养基 | 第43-44页 |
| 2．5 小结 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-46页 |
| 第三章 重组大肠杆菌DH5α／pBV220摇瓶发酵的研究 | 第46-58页 |
| 3．1 前言 | 第46-47页 |
| 3．2 材料与方法 | 第47-50页 |
| 3．2．1 菌种和培养基 | 第47页 |
| 3．2．2 培养方法 | 第47页 |
| 3．2．3 分析方法 | 第47-50页 |
| 3．3 种子菌龄对工程菌生长和rhIFN—γ表达的影响 | 第50-51页 |
| 3．4 接种量对工程菌生长和rhIFN-γ表达的影响 | 第51-52页 |
| 3．5 诱导时机对工程菌生长和rhIFN-γ表达的影响 | 第52-54页 |
| 3．6 优化条件下工程菌DH5α／pBV220的培养 | 第54-56页 |
| 3．6．1 优化条件下工程菌的生长和目标蛋白的表达 | 第54页 |
| 3．6．2 优化条件下工程菌DH5α／pBV220深层发酵特性 | 第54-56页 |
| 3．7 小结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-58页 |
| 第四章 重组大肠杆菌DH5α／pBV220在5L发酵罐上的间歇培养 | 第58-71页 |
| 4．1 前言 | 第58页 |
| 4．2 材料与方法 | 第58-60页 |
| 4．2．1 菌种和培养基 | 第59页 |
| 4．2．2 发酵罐 | 第59页 |
| 4．2．3 培养方法 | 第59页 |
| 4．2．4 rhIFN-γ的分离纯化 | 第59-60页 |
| 4．2．5 分析方法 | 第60页 |
| 4．3 通气量对工程菌生长和rhIFN-γ表达及分离纯化的影响 | 第60-62页 |
| 4．3．1 通气量对工程菌生长和rhIFN-γ表达的影响 | 第60-61页 |
| 4．3．2 通气量对rhIFN—γ分离纯化的影响 | 第61-62页 |
| 4．4 搅拌速度对工程菌生长、rhIFN-γ表达及分离纯化的影响 | 第62-65页 |
| 4．4．1 搅拌速度对工程菌生长和rhIFN—γ表达的影响 | 第62-63页 |
| 4．4．2 搅拌速度对rhIFN-γ分离纯化的影响 | 第63-65页 |
| 4．5 表达时间对工程菌生长和rhIFN—γ表达的影响 | 第65-66页 |
| 4．6 优化条件下工程菌DH5α／pBV220的培养 | 第66-68页 |
| 4．7 小结 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-71页 |
| 第五章 重组大肠杆菌DH5α／pBV220在5L发酵罐上的高密度流加培养 | 第71-91页 |
| 5．1 前言 | 第71页 |
| 5．2 材料与方法 | 第71-72页 |
| 5．2．1 菌种和培养基 | 第71-72页 |
| 5．2．2 发酵罐 | 第72页 |
| 5．2．3 一级种子制备 | 第72页 |
| 5．2．4 分批流加培养 | 第72页 |
| 5．2．5 分析方法 | 第72页 |
| 5．3 建立优化数学模型进一步筛选培养基 | 第72-82页 |
| 5．3．1 单因子实验设计 | 第73页 |
| 5．3．2 数学模型的建立 | 第73页 |
| 5．3．3 模型的求解 | 第73-74页 |
| 5．3．4 模型的检验 | 第74-75页 |
| 5．3．5 模型的优化 | 第75页 |
| 5．3．6 培养基的优化 | 第75-82页 |
| 5．4 工程菌DH5α／pBV220的生长曲线 | 第82页 |
| 5．5 溶氧对rhIFN-γ产量的影响 | 第82-84页 |
| 5．6 诱导时机对rhIFN-γ产量的影响 | 第84-85页 |
| 5．7 碳源种类对rhIFN-γ产量的影响 | 第85-88页 |
| 5．7．1 碳源种类对rhIFN-γ产量的影响 | 第85-86页 |
| 5．7．2 碳源种类对工程菌发酵过程代谢参数的影响 | 第86-88页 |
| 5．8 小结 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-91页 |
| 第六章 DH5α／pBV220在50L发酵罐上的放大研究 | 第91-98页 |
| 6．1 前言 | 第91页 |
| 6．2 材料与方法 | 第91-93页 |
| 6．2．1 菌种及培养基 | 第91页 |
| 6．2．2 发酵罐 | 第91-92页 |
| 6．2．3 一级种子制备（摇瓶培养） | 第92页 |
| 6．2．4 二级种子制备（5L发酵罐培养） | 第92页 |
| 6．2．5 50L发酵罐放大培养 | 第92-93页 |
| 6．3 发酵过程的放大依据 | 第93页 |
| 6．4 间歇培养的放大研究 | 第93-95页 |
| 6．5 流加培养的放大研究 | 第95-96页 |
| 6．6 小结 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-98页 |
| 第二部分 α-糜蛋白酶及重组人γ-干扰素的复性研究 | 第98-143页 |
| 第一章 胍变α-糜蛋白酶的液相色谱复性 | 第98-131页 |
| 1．1 前言 | 第98页 |
| 1．2 实验部分 | 第98-105页 |
| 1．2．1 仪器 | 第98-99页 |
| 1．2．2 试剂 | 第99-100页 |
| 1．2．3 α-Chy的变性 | 第100页 |
| 1．2．4 α-Chy的复性 | 第100-101页 |
| 1．2．5 α-Chy活性的测定 | 第101-102页 |
| 1．2．6 蛋白含量的测量 | 第102-103页 |
| 1．2．7 计量置换保留模型计算 | 第103-105页 |
| 1．3 蛋白质变性方法对胍变α-Chy复性效率的影响 | 第105-116页 |
| 1．3．1 不同胍浓度对α-Chy复性效率的影响 | 第105页 |
| 1．3．2 变性剂中疏水填料加入对胍变α-chy复性效率的影响 | 第105-108页 |
| 1．3．3 变性剂中硅胶基质的加入对胍变α-Chy复性效率的影响 | 第108-109页 |
| 1．3．4 变性剂中物质Ⅰ的加入对胍变α-Chy复性效率的影响 | 第109-113页 |
| 1．3．5 变性剂中物质Ⅱ的加入对胍变α-Chy复性效率的影响 | 第113-116页 |
| 1．4 疏水色谱固定相配基种类对胍变α-Chy复性效率的影响 | 第116-123页 |
| 1．4．1 不同色谱柱疏水性比较 | 第116-117页 |
| 1．4．2 不同疏水色谱对胍变α-Chy复性效率的影响 | 第117-122页 |
| 1．4．3 用Z、logI对α-Chy在不同疏水柱中保留行为的表征 | 第122-123页 |
| 1．5 疏水色谱固定相和流动相对胍变α-Chy复性效率的影响 | 第123-127页 |
| 1．5．1 色谱流动相对胍变α-Chy复性效率的影响 | 第123-124页 |
| 1．5．2 色谱固定相对胍变α-Chy复性效率的影响 | 第124-126页 |
| 1．5．3 扣除疏水色谱流动相和固定相引起的活性损失后α-Chy的活性回收率 | 第126-127页 |
| 1．6 小结 | 第127-129页 |
| 参考文献 | 第129-131页 |
| 第二章 重组人γ-干扰素的复性与同时纯化 | 第131-143页 |
| 2．1 前言 | 第131页 |
| 2．2 材料与方法 | 第131-134页 |
| 2．2．1 缓冲液 | 第131页 |
| 2．2．2 包含体破碎 | 第131-132页 |
| 2．2．3 包含体清洗 | 第132页 |
| 2．2．4 包含体溶解 | 第132页 |
| 2．2．5 rhIFN-γ的复性与同时纯化 | 第132页 |
| 2．2．6 检测方法 | 第132-134页 |
| 2．3 重组大肠杆菌DH5α／pBV220的破碎 | 第134-135页 |
| 2．4 包含体的洗涤 | 第135页 |
| 2．5 包含体的溶解 | 第135-137页 |
| 2．5．1 变性剂浓度对包含体溶解的影响 | 第135-136页 |
| 2．5．2 变性剂抽提时间对包含体溶解的影响 | 第136页 |
| 2．5．3 变性剂加入量对包含体溶解的影响 | 第136-137页 |
| 2．6 高效疏水色谱对rhIFN-γ的复性与同时纯化 | 第137-140页 |
| 2．6．1 洗脱方式对rhIFN-γ的复性与同时纯化的影响 | 第137-138页 |
| 2．6．2 疏水色谱流动相对rhIFN-γ的复性与同时纯化的影响 | 第138页 |
| 2．6．3 疏水色谱固定相对rhIFN-γ的复性与同时纯化的影响 | 第138-140页 |
| 2．7 小结 | 第140-142页 |
| 参考文献 | 第142-143页 |
| 致谢 | 第143-144页 |
| 作者简介 | 第144页 |
