| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-14页 |
| 第一章 NS5ATP1重组蛋白的表达及抗体的制备 | 第14-22页 |
| 一、前 言 | 第14-15页 |
| 二、材料与方法 | 第15-17页 |
| 1. 材料 | 第15页 |
| ·菌株与载体 | 第15页 |
| ·试剂 | 第15页 |
| ·动物 | 第15页 |
| 2. 方法 | 第15-17页 |
| ·pET-32a(+)-NS5ATP1表达载体的构建 | 第15-16页 |
| ·重组蛋白的小量诱导表达 | 第16页 |
| ·NS5ATP1重组蛋白的大量诱导表达及菌体超声处理 | 第16页 |
| ·NS5ATP1重组蛋白的亲和层析纯化 | 第16页 |
| ·兔多克隆抗体的制备 | 第16-17页 |
| ·多克隆抗体效价ELISA法分析 | 第17页 |
| ·多克隆抗体的Westem blot鉴定 | 第17页 |
| 三、 结果 | 第17-20页 |
| 1.成功构建了NS5ATP1原核表达载体 | 第17-18页 |
| ·pET-32a(+)-NS5ATP1重组质粒构建示意图(如图1.1) | 第17页 |
| ·pET-32a(+)-NS5ATP1重组质粒的构建 | 第17-18页 |
| 2.成功的诱导表达纯化了NS5ATP1蛋白 | 第18-20页 |
| ·重组蛋白的小量诱导表达和Western blot免疫印迹分析 | 第18-19页 |
| ·融合蛋白的大量获得 | 第19页 |
| ·融合蛋白的柱上复性和纯化 | 第19-20页 |
| 3.成功获得了高滴度高特异度的兔抗NS5ATP1血清 | 第20页 |
| ·多克隆抗体的Western blot鉴定 | 第20页 |
| 四、讨论 | 第20-22页 |
| 第二章 免疫组化方法标记NS5ATP1表达分布情况的研究 | 第22-28页 |
| 一、前言 | 第22页 |
| 二、材料与方法 | 第22-23页 |
| 1.材料 | 第22-23页 |
| ·病理切片 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·仪器设备 | 第22-23页 |
| ·动物 | 第23页 |
| 2. 方法 | 第23页 |
| ·免疫组织化学 | 第23页 |
| ·大鼠急性肝衰竭模型的建立 | 第23页 |
| 三、结果 | 第23-27页 |
| 1.肝脏病理切片免疫组织化学调查 | 第23-25页 |
| ·NS5ATP1在正常肝脏中表达阴性 | 第23页 |
| ·NS5ATP1在轻微坏死肝脏中表达 | 第23页 |
| ·NS5ATP1在重型肝炎肝脏中表达情况 | 第23-25页 |
| 2. 动物模型肝脏中NS5ATP1的表达情况 | 第25-27页 |
| ·正常鼠肝脏中NS5ATP1的表达情况 | 第25页 |
| ·四氯化碳SD大鼠重症肝衰竭模型的NS5ATP1表达情况 | 第25页 |
| ·氨基半乳糖联合LPS SD大鼠重症肝衰竭NS5ATP1表达情况 | 第25-27页 |
| 四、讨论 | 第27-28页 |
| 第三章 NS5ATP1过表达对肝细胞影响的研究 | 第28-40页 |
| 一、前言 | 第28页 |
| 二、材料与方法 | 第28-31页 |
| 1.材料 | 第28-29页 |
| ·菌种、载体 | 第28页 |
| ·试剂 | 第28-29页 |
| ·细胞 | 第29页 |
| ·仪器设备 | 第29页 |
| ·动物 | 第29页 |
| 2. 方法 | 第29-31页 |
| ·引物设计 | 第29页 |
| ·PCR扩增NS5ATP1基因 | 第29-30页 |
| ·pEGGP-C1-NS5ATP1荧光真核表达载体的构建 | 第30页 |
| ·细胞的转染与观察 | 第30页 |
| ·细胞核hoechst染色 | 第30页 |
| ·小鼠体内转染分析 | 第30页 |
| ·免疫组织化学 | 第30页 |
| ·细胞的活性氧离子损伤的调查 | 第30-31页 |
| 三、结果 | 第31-39页 |
| 1.成功构建了pEGFP-C1-NS5ATP1荧光表达载体 | 第31-33页 |
| ·pEGFP-C1-NS5ATP1荧光表达载体构建示意图 | 第31页 |
| ·pEGFP-C1-NS5ATP1荧光表达载体的成功构建 | 第31-32页 |
| ·测序结果 | 第32-33页 |
| 2.细胞的转染与观察 | 第33-35页 |
| ·NS5ATP1基因在肝癌细胞株Bel 7402中的实时表达情况 | 第33页 |
| ·细胞核碎裂 | 第33-35页 |
| ·细胞表达蛋白的Westem blot鉴定 | 第35页 |
| ·表达NS5ATP1细胞的活性氧的检测 | 第35页 |
| 3.体内转染结果 | 第35-39页 |
| ·体内转染荧光表达情况 | 第35-37页 |
| ·免疫组织化学分析 | 第37-39页 |
| 四、讨论 | 第39-40页 |
| 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
| 附录 | 第43-50页 |
| 综述：肝细胞损伤机制的探讨 | 第50-68页 |
| 个人简历 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
