| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语表(ABBREVIATION) | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-29页 |
| ·分类及基本特性 | 第14-15页 |
| ·分类及理化特性 | 第14页 |
| ·体外生长增殖特性 | 第14-15页 |
| ·CSFV分子流行病学研究 | 第15-17页 |
| ·CSFV分子生物学研究 | 第17-23页 |
| ·CSFV的基因组结构 | 第17-18页 |
| ·CSFV基因组编码的蛋白及功能 | 第18-23页 |
| ·CSFV的检测 | 第23-26页 |
| ·病毒分离鉴定 | 第23页 |
| ·动物接种试验 | 第23-24页 |
| ·兔体交叉免疫试验 | 第24页 |
| ·荧光抗体试验 | 第24页 |
| ·新城疫病毒(NDV)强化试验 | 第24页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第24页 |
| ·免疫酶染色试验 | 第24-25页 |
| ·荧光抗体病毒中和试验 | 第25页 |
| ·反转录聚合酶链式反应 | 第25页 |
| ·多重聚合酶链式反应 | 第25页 |
| ·核酸探针杂交试验 | 第25页 |
| ·基因芯片检测技术 | 第25-26页 |
| ·荧光定量聚合酶链式反应 | 第26页 |
| ·单克隆抗体在CSFV诊断及分子生物学研究中的应用 | 第26-27页 |
| ·昆虫杆状病毒表达系统(BEVS)研究进展 | 第27-29页 |
| ·杆状病毒表达系统简介 | 第27-28页 |
| ·CSFV E2基因在昆虫细胞中表达研究进展 | 第28-29页 |
| 第二部分 猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2的表达 | 第29-56页 |
| ·目的与意义 | 第29页 |
| ·材料 | 第29-34页 |
| ·毒株、菌种和载体 | 第29-31页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第31页 |
| ·血清和酶标抗体 | 第31页 |
| ·主要试剂及溶液配置 | 第31-34页 |
| ·方法 | 第34-46页 |
| ·引物设计 | 第34页 |
| ·总RNA的制备 | 第34-35页 |
| ·RT-PCR扩增与检测 | 第35页 |
| ·PCR产物回收 | 第35-36页 |
| ·克隆质粒的构建 | 第36-38页 |
| ·重组原核表达质粒的构建 | 第38-39页 |
| ·重组杆状病毒的构建 | 第39-41页 |
| ·目的基因的原核表达 | 第41-42页 |
| ·目的基因的杆状病毒表达 | 第42-45页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第45页 |
| ·Western blot检测 | 第45-46页 |
| ·杆状病毒表达间接免疫荧光 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-52页 |
| ·E2基因RT-PCR扩增结果 | 第46页 |
| ·E2基因ABCD和AD抗原区PCR扩增结果 | 第46-47页 |
| ·重组原核表达质粒的酶切鉴定 | 第47页 |
| ·pFastBac-E2的酶切鉴定 | 第47页 |
| ·Bacmid-E2的PCR鉴定 | 第47-48页 |
| ·E2基因在大肠杆菌的表达 | 第48页 |
| ·最佳诱导时间 | 第48-49页 |
| ·表达产物的可溶性分析 | 第49页 |
| ·表达产物的纯化 | 第49-51页 |
| ·诱导表达及Western blot分析 | 第51-52页 |
| ·杆状病毒在昆虫细胞上的增殖 | 第52页 |
| ·E2蛋白重组杆状病毒表达间接免疫荧光结果 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-56页 |
| ·CSFV的增殖 | 第52-53页 |
| ·引物设计 | 第53页 |
| ·原核表达 | 第53-54页 |
| ·昆虫细胞/杆状病毒表达系统 | 第54-56页 |
| 第三部分 猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | 第56-69页 |
| ·目的与意义 | 第56页 |
| ·材料 | 第56-58页 |
| ·生物材料 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·细胞培养用试剂及相关试剂 | 第56-57页 |
| ·融合细胞染色体计数用试剂 | 第57页 |
| ·腹水纯化用试剂 | 第57页 |
| ·ELISA相关试剂 | 第57-58页 |
| ·其它试剂 | 第58页 |
| ·方法 | 第58-63页 |
| ·抗原制备 | 第58页 |
| ·小鼠免疫 | 第58页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第58-59页 |
| ·细胞融合 | 第59-60页 |
| ·阳性杂交瘤细胞筛选与克隆化 | 第60-61页 |
| ·杂交瘤细胞冻存和复苏 | 第61页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第61-63页 |
| ·单克隆抗体稳定性鉴定 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-67页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第63页 |
| ·融合后筛选及克隆化培养结果 | 第63-64页 |
| ·杂交瘤细胞及单克隆抗体的特性鉴定 | 第64-65页 |
| ·间接免疫荧光结果 | 第65-66页 |
| ·Western blot检测 | 第66页 |
| ·腹水纯化结果 | 第66-67页 |
| ·单克隆抗体的稳定性分析 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| ·单克隆抗体制备 | 第67页 |
| ·单克隆抗体与CSFV毒株的反应 | 第67-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 附录 | 第80页 |