| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-24页 |
| ·牛结核病简介 | 第13-17页 |
| ·病原 | 第13页 |
| ·流行病学 | 第13-14页 |
| ·牛结核病的诊断 | 第14-16页 |
| ·免疫预防 | 第16页 |
| ·综合防制措施 | 第16-17页 |
| ·展望 | 第17页 |
| ·牛结核病疫苗研究现状 | 第17-24页 |
| ·减毒疫苗 | 第17-18页 |
| ·重组卡介苗(rBCG) | 第18-19页 |
| ·亚单位疫苗 | 第19页 |
| ·DNA疫苗 | 第19-22页 |
| ·其它牛结核病疫苗 | 第22-24页 |
| 第二章 牛结核病单价及二价融合DNA疫苗的初步研究 | 第24-51页 |
| 1.材料和方法 | 第24-37页 |
| ·载体、菌种和细胞 | 第24页 |
| ·血清与二抗 | 第24页 |
| ·实验动物 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要溶液和培养基的配制 | 第24-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·牛分枝杆菌的培养及其基因组DNA的提取 | 第28页 |
| ·引物的设计 | 第28-29页 |
| ·目的基因的扩增 | 第29-30页 |
| ·PCR产物与pMD18-T载体的连接转化 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·兔抗牛分枝杆菌PPD和HSP65血清的制备 | 第33页 |
| ·重组质粒在SP2/0细胞中的瞬时表达 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的大量提取 | 第34-35页 |
| ·动物分组及DNA免疫接种 | 第35页 |
| ·免疫小鼠血清中特异性抗体的测定 | 第35页 |
| ·免疫小鼠脾淋巴细胞增殖试验 | 第35-36页 |
| ·免疫小鼠IFN～γ水平的测定 | 第36页 |
| ·数据处理 | 第36-37页 |
| 2.结果 | 第37-47页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·目的片段的序列分析 | 第39页 |
| ·重组质粒在SP2/0细胞中的表达 | 第39-41页 |
| ·免疫小鼠血清特异性抗体的检测 | 第41-42页 |
| ·免疫小鼠脾淋巴细胞增殖试验 | 第42-44页 |
| ·免疫小鼠脾淋巴细胞IFN～γ分泌情况 | 第44-47页 |
| 3.讨论 | 第47-51页 |
| 第三章 牛结核病融合及多价组合DNA疫苗的研究 | 第51-81页 |
| 1.材料和方法 | 第51-60页 |
| ·载体、菌种和细胞 | 第51页 |
| ·血清、二抗和实验动物 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·主要溶液和培养基的配制 | 第51-52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·目的基因引物的设计 | 第52-53页 |
| ·目的基因的扩增 | 第53-54页 |
| ·PCR产物与pMD18-T载体的连接及重组质粒的鉴定 | 第54-55页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第55页 |
| ·重组质粒pET-MAE在大肠杆菌中的诱导表达及纯化 | 第55-56页 |
| ·纯化蛋白的浓度测定 | 第56页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第56-57页 |
| ·真核表达质粒的体外转染 | 第57页 |
| ·动物分组及DNA免疫接种 | 第57页 |
| ·间接ELISA检测小鼠血清抗体效价 | 第57-58页 |
| ·脾淋巴细胞增殖试验 | 第58页 |
| ·免疫小鼠脾细胞分泌的IFN～γ和IL-2水平的测定 | 第58-59页 |
| ·牛分枝杆菌BCG的攻毒试验 | 第59页 |
| ·攻毒小鼠肺脏荷菌量的测定 | 第59页 |
| ·攻毒小鼠肺组织间接免疫荧光试验 | 第59页 |
| ·攻毒后小鼠肺脏病理变化 | 第59-60页 |
| ·数据处理 | 第60页 |
| 2.结果 | 第60-77页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第60-61页 |
| ·重组质粒pMD-E6、pMD-MA-1和pMD-MA-2的酶切鉴定 | 第61-62页 |
| ·重组质粒pET-MA和pET-MAE的酶切鉴定 | 第62页 |
| ·rMAE蛋白的表达纯化及浓度的测定 | 第62-63页 |
| ·重组质粒pCMA和pCMAE的鉴定 | 第63-64页 |
| ·目的片段的序列分析 | 第64页 |
| ·重组质粒pCMA和pCMAE的体外转染 | 第64页 |
| ·小鼠血清特异性抗体的检测 | 第64-68页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞增殖水平的测定 | 第68-69页 |
| ·免疫小鼠脾淋巴细胞IFN～γ分泌情况 | 第69-71页 |
| ·免疫小鼠脾淋巴细胞IL-2分泌情况 | 第71-73页 |
| ·攻毒小鼠肺组织荷菌数 | 第73-74页 |
| ·小鼠肺脏间接免疫荧光试验 | 第74-75页 |
| ·小鼠肺脏组织学病变(H.E染色) | 第75-77页 |
| 3.讨论 | 第77-81页 |
| 第四章 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-91页 |
| 附录 | 第91-110页 |
| 附录1 a85b、esat-6、hsp65、mpb64基因和a85b-esat-6、hsp65-esat-6、mpb64-esat-6融合基因测序结果(seq)与牛分枝杆菌AF2122/97株相应基因的核苷酸同源性比较 | 第91-104页 |
| 附录2 mpb64-ag85b和mpb64-ag85b-esat-6融合基因测序结果(seq)与牛分枝杆菌AF2122D7株相应基因的核苷酸同源性比较 | 第104-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 作者简历 | 第111页 |
