福寿螺多功能纤维素酶基因egx的克隆与功能研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-22页 |
| ·纤维素的利用 | 第9-12页 |
| ·纤维素的结构 | 第9-10页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第10-12页 |
| ·微生物和动物纤维素酶研究近况 | 第12-17页 |
| ·纤维素酶分类 | 第12页 |
| ·微生物纤维素酶结构 | 第12-16页 |
| ·微生物纤维素酶降解模型 | 第16-17页 |
| ·动物纤维素酶的研究 | 第17-18页 |
| ·纤维素酶应用展望 | 第18页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第18-20页 |
| ·毕赤酵母表达系统优点 | 第18页 |
| ·毕赤酵母表达宿主菌 | 第18-19页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第19页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第19-20页 |
| 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-34页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·动物材料 | 第22页 |
| ·质粒和菌株 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·试剂和仪器 | 第22页 |
| ·PCR引物 | 第22-24页 |
| ·方法 | 第24-34页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第24页 |
| ·DNA限制性酶切反应 | 第24-25页 |
| ·DNA片段的电泳回收 | 第25页 |
| ·DNA片段连接 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·质粒DNA转化大肠杆菌 | 第26页 |
| ·蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第26-27页 |
| ·毕赤酵母电击感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·酵母电击转化 | 第28页 |
| ·酵母基因组的提取 | 第28-29页 |
| ·酵母重组子的PCR检测 | 第29页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中甲醇诱导分泌表达 | 第29-30页 |
| ·egx基因末端缺失PCR | 第30页 |
| ·福寿螺组织RNA提取和反转录 | 第30-31页 |
| ·考马斯亮蓝法测定蛋白质含量标准曲线绘制 | 第31页 |
| ·纤维素酶活力测定 | 第31-33页 |
| ·菌密度测定 | 第33-34页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第34-59页 |
| ·结果 | 第34-49页 |
| ·福寿螺多功能纤维素酶egx基因的克隆 | 第34-36页 |
| ·表达载体的构建 | 第36-38页 |
| ·酵母转化及重组子表型筛选 | 第38页 |
| ·酵母重组子的PCR检测 | 第38-39页 |
| ·PCR阳性重组子的表达 | 第39-40页 |
| ·酶活力的计算 | 第40页 |
| ·全长序列末端缺失片段的扩增 | 第40-49页 |
| ·讨论 | 第49-54页 |
| ·EST片段克隆结果和分析 | 第54-59页 |
| 第四章 全文结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简历 | 第66页 |
