| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-20页 |
| ·植物病原细菌黄单胞菌属(Xanthomonas)的概述 | 第11-12页 |
| ·黄单胞菌属(Xanthomonas)的分类及简介 | 第11页 |
| ·十字花科黑腐病菌(Xcc)概况 | 第11-12页 |
| ·hrp基因簇与Ⅲ型分泌系统 | 第12-14页 |
| ·hrp基因簇 | 第12-13页 |
| ·Ⅲ型分泌系统 | 第13页 |
| ·植物病原菌中两种不同的hrp基因簇 | 第13-14页 |
| ·植物病原菌Ⅲ型分泌系统调控机制的研究进展 | 第14-18页 |
| ·解淀粉欧文氏菌中的Ⅲ型分泌系统 | 第14页 |
| ·丁香假单胞菌中的Ⅲ型分泌系统 | 第14-16页 |
| ·茄科罗尔斯通氏菌中的Ⅲ型分泌系统 | 第16页 |
| ·黄单胞菌属中的Ⅲ型分泌系统 | 第16-18页 |
| ·Xcc Ⅲ型分泌系统调控机制研究中的空白 | 第18页 |
| ·利用sacB基因构建报告质粒、EZ-Tn5随机突变及转座子突变体的筛选 | 第18-19页 |
| ·本研究工作的目的、内容及意义 | 第19-20页 |
| ·目的与内容 | 第19页 |
| ·意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-36页 |
| ·材料 | 第20-26页 |
| ·供试菌株和质粒 | 第20-22页 |
| ·本研究所用的引物 | 第22-23页 |
| ·抗生素及其它试剂 | 第23页 |
| ·细菌培养基 | 第23-25页 |
| ·溶液与缓冲液 | 第25-26页 |
| ·实验耗材 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-36页 |
| ·菌株培养条件及保存 | 第26页 |
| ·总DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·质粒的提取 | 第27页 |
| ·从G-细菌中提取总RNA | 第27-28页 |
| ·PCR反应 | 第28-29页 |
| ·引物设计 | 第28页 |
| ·模板制备 | 第28页 |
| ·反应体系 | 第28-29页 |
| ·反应条件 | 第29页 |
| ·反转录PCR(RT-PCR) | 第29-30页 |
| ·PCR扩增产物检测 | 第30页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第30页 |
| ·DNA片段的酶切、纯化和回收 | 第30-31页 |
| ·DNA的酶切 | 第30-31页 |
| ·DNA片段纯化 | 第31页 |
| ·DNA片段胶回收 | 第31页 |
| ·DNA连接 | 第31-32页 |
| ·电脉冲转化感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·电脉冲转化 | 第32页 |
| ·三亲本接合(triparental conjugation) | 第32页 |
| ·植株的致病性试验 | 第32-33页 |
| ·过敏反应(HR) | 第33-34页 |
| ·胞外多糖的检测 | 第34页 |
| ·胞外酶的检测 | 第34-35页 |
| ·胞外蛋白酶的检测 | 第34页 |
| ·胞外淀粉酶的检测 | 第34页 |
| ·胞外纤维素酶的检测 | 第34-35页 |
| ·β-葡糖苷酸酶(GUS)活性测定 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-57页 |
| ·用于鉴定Xcc正向调控hrpX基因的报告质粒的构建 | 第36-38页 |
| ·报告质粒构建的技术路线 | 第36-37页 |
| ·sacB基因的扩增和克隆 | 第37页 |
| ·报告系统的构建 | 第37-38页 |
| ·报告系统的验证 | 第38页 |
| ·EZ-Tn5转座子系统筛选目的基因 | 第38-40页 |
| ·随机突变及转座子突变体的筛选 | 第38-39页 |
| ·转座子突变体的分析 | 第39-40页 |
| ·XB001 | 第39页 |
| ·XB002 | 第39-40页 |
| ·标记置换获得突变体MXB001及MXB002 | 第40-41页 |
| ·MXB001 | 第40页 |
| ·MXB002 | 第40-41页 |
| ·相关突变体的功能互补 | 第41-46页 |
| ·MXB001的互补构建 | 第41-44页 |
| ·构建策略 | 第41页 |
| ·构建步骤 | 第41-44页 |
| ·MXB002的互补构建 | 第44-46页 |
| ·构建策略 | 第44页 |
| ·构建步骤 | 第44-46页 |
| ·GUS报告质粒的导入及GUS活性测定 | 第46-50页 |
| ·GUS报告质粒的导入 | 第46页 |
| ·GUS活性定性测定 | 第46-48页 |
| ·GUS活性定量测定 | 第48-50页 |
| ·HR反应检测 | 第50页 |
| ·胞外多糖和胞外酶的检测 | 第50-52页 |
| ·RT-PCR检测表明XC4007,XC4008不属于同一个转录单元 | 第52-53页 |
| ·生物信息学分析 | 第53-57页 |
| ·同源性分析 | 第53-54页 |
| ·分子量与等电点分析 | 第54-55页 |
| ·亲疏水性分析 | 第55页 |
| ·跨膜结构域分析 | 第55-56页 |
| ·功能域分析 | 第56-57页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第57-61页 |
| ·结论 | 第57-58页 |
| ·构建的报告质粒可用于筛选Xcc正向调控hrpX基因 | 第57页 |
| ·XC4007与其下游的XC4008不属于同一转录单元 | 第57页 |
| ·XC4007正向调控xopN,hrpF,hrpX的表达 | 第57-58页 |
| ·XC4007与致病性有关 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-61页 |
| ·关于没有直接筛选正向调控hrpG的基因 | 第58-59页 |
| ·利用EZ-Tn5全基因组筛选正向调控hrpX的基因的转座子突变体 | 第59页 |
| ·关于XC4007与HR反应的关系 | 第59页 |
| ·关于突变体XB002所涉及的基因 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第67页 |
