| 中文摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-26页 |
| ·BVDV 生物学特性 | 第14-19页 |
| ·BVDV 形态和理化学特性 | 第14页 |
| ·病毒的生物多样性 | 第14-15页 |
| ·BVDV 的基因组结构 | 第15-16页 |
| ·BVDV 蛋白结构的研究 | 第16-18页 |
| ·BVDV 的分型 | 第18-19页 |
| ·猪感染BVDV 的历史回顾 | 第19-20页 |
| ·BVDV 对猪的致病性研究 | 第20-22页 |
| ·经胎盘感染和繁殖障碍 | 第20页 |
| ·持续感染与免疫耐受 | 第20-21页 |
| ·猪感染BVDV 对CSFV 的影响 | 第21页 |
| ·猪感染BVDV 的临床症状及病理变化 | 第21-22页 |
| ·猪感染BVDV 的传染来源 | 第22-23页 |
| ·来自牛群中的污染 | 第22页 |
| ·来自污染有BVDV 的疫苗 | 第22-23页 |
| ·猪感染BVDV 和猪瘟的鉴别诊断 | 第23-26页 |
| ·血清学诊断方法 | 第23-24页 |
| ·分子生物学诊断方法 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-38页 |
| ·猪感染牛病毒性腹泻－黏膜病血清学调查 | 第26-29页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·ELISA 所用材料及溶液 | 第26页 |
| ·酶标二抗稀释液 | 第26页 |
| ·底物稀释液 | 第26页 |
| ·底物浓缩液 | 第26页 |
| ·底物溶液 | 第26页 |
| ·终止液 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-29页 |
| ·复合捕获阻断ELISA 的建立 | 第26-29页 |
| ·酶标反应板均一性的测定 | 第26-27页 |
| ·猪抗BVDV 阳性血清的制备及其效价测定 | 第27页 |
| ·酶标二抗工作浓度的确定 | 第27页 |
| ·阻断时间的确定 | 第27页 |
| ·被检血清最佳稀释度的确定 | 第27-28页 |
| ·被检血清反应时间的确定 | 第28页 |
| ·酶标二抗反应时间的确定 | 第28页 |
| ·底物反应时间的确定 | 第28页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第28-29页 |
| ·猪血清BVDV 抗体和CSFV 抗体的检测 | 第29页 |
| ·血清样品BVDV 抗体检测 | 第29页 |
| ·血清样品CSFV 抗体检测 | 第29页 |
| ·猪感染牛病毒性腹泻－黏膜病病毒病原学调查 | 第29-32页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·病料与细胞 | 第29页 |
| ·RT-PCR 主要试剂 | 第29页 |
| ·RT-PCR 所用主要仪器 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-32页 |
| ·检测BVDV 引物设计与合成 | 第30页 |
| ·RNA 的提取 | 第30页 |
| ·BVDV 目的片段的扩增 | 第30-31页 |
| ·BVDV 阳性样品中其它病毒的检测 | 第31-32页 |
| ·引物设计与合成 | 第31页 |
| ·BVDV 阳性样品中CSFV 的检测 | 第31-32页 |
| ·电泳 | 第32页 |
| ·猪源BVDV 与牛源BVDV 的分离鉴定及2 型BVDV 的克隆纯化 | 第32-35页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·病毒及细胞 | 第32页 |
| ·试剂及耗材 | 第32页 |
| ·细胞培养所用溶液 | 第32页 |
| ·引物 | 第32-33页 |
| ·实验仪器 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-35页 |
| ·细胞培养 | 第33-34页 |
| ·处理病料和血清 | 第34页 |
| ·细胞接毒 | 第34页 |
| ·收获病毒 | 第34页 |
| ·RT-PCR 检测细胞液中BVDV 的方法 | 第34页 |
| ·电泳 | 第34页 |
| ·通用引物扩增片段的克隆测序分析 | 第34页 |
| ·病毒在MDBK 细胞上的克隆 | 第34-35页 |
| ·JN-1 和JN-2 株BVDV E2 基因的克隆测序 | 第35-38页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·病毒 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-38页 |
| ·细胞组织RNA 的提取 | 第35页 |
| ·基因的RT-PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·制胶 | 第36页 |
| ·电泳 | 第36-37页 |
| ·目的基因的连接: | 第37页 |
| ·转化 DH5α 菌株 | 第37页 |
| ·PCR 方法鉴定阳性转化子测序分析 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-63页 |
| ·猪感染牛病毒性腹泻－黏膜病血清学调查 | 第38-53页 |
| ·酶标反应板均一性的测定结果 | 第38页 |
| ·猪抗BVDV 阳性血清的制备及其效价测定 | 第38-39页 |
| ·酶标二抗工作浓度的确定 | 第39页 |
| ·阻断时间的确定 | 第39-40页 |
| ·被检血清最佳稀释度的确定 | 第40-41页 |
| ·待检血清反应时间的确定 | 第41页 |
| ·酶标二抗反应时间的确定 | 第41-42页 |
| ·底物反应时间的确定 | 第42-43页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第43-44页 |
| ·阻断试验 | 第44-45页 |
| ·特异性交叉反应试验 | 第45-46页 |
| ·重复性试验 | 第46-47页 |
| ·板内检测样品的重复性试验 | 第46-47页 |
| ·板间检测样品的重复性试验 | 第47页 |
| ·复合捕获阻断ELISA 的基本程序 | 第47-48页 |
| ·血清样品中BVDV 的检测结果 | 第48页 |
| ·血样的CSFV 抗体效价测定 | 第48-53页 |
| ·猪感染牛病毒性腹泻－黏膜病病毒病原学调查 | 第53-54页 |
| ·套式PCR 方法检测疑似猪瘟病料的结果 | 第53页 |
| ·BVDV 阳性样品中CSFV 的检测结果 | 第53-54页 |
| ·BVDV 阳性样品中PRRSV 的检测结果 | 第54页 |
| ·猪源BVDV 与牛源BVDV 的分离鉴定及2 型BVDV 的克隆纯化 | 第54-59页 |
| ·猪源BVDV 接种MDBK 细胞 | 第54-55页 |
| ·牛源BVDV 接种MDBK 细胞 | 第55页 |
| ·接毒细胞液中BVDV 的检测结果 | 第55-57页 |
| ·BVDV 通用引物检测结果 | 第55-56页 |
| ·BVDV 1 型引物扩增结果 | 第56页 |
| ·BVDV 2 型引物扩增结果 | 第56-57页 |
| ·5′-UTR 测序与分析 | 第57-58页 |
| ·纯化前后TCID50 测定结果 | 第58-59页 |
| ·JN-1 和JN-2 株BVDV E2 基因的克隆测序 | 第59-63页 |
| ·E2 基因的克隆测序分析 | 第59-63页 |
| ·JN-1 和JN-2 的E2 基因的扩增结果 | 第59-60页 |
| ·扩增基因与BVDV 代表毒株之间的同源性 | 第60页 |
| ·JN-1、JN-2 的E2 基因进化树分析 | 第60-61页 |
| ·JN-1 株与JN-2 株E2 蛋白的抗原性分析 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-66页 |
| ·猪感染牛病毒性腹泻－黏膜病病毒血清学调查 | 第63-64页 |
| ·猪感染牛病毒性腹泻－黏膜病病毒病原学调查 | 第64页 |
| ·猪源BVDV 与牛源BVDV 的分离鉴定及2 型BVDV 的克隆纯化 | 第64-65页 |
| ·JN-1 和JN-2 株BVDV E2 基因的克隆测序 | 第65-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读硕士期间论文发表情况 | 第76-77页 |
| 硕士学位论文内容简介及自评 | 第77页 |
