| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 文献综述 | 第13-37页 |
| 一 海洋浮游藻 | 第13-19页 |
| 二、浮游藻生长率的研究 | 第19-22页 |
| 三 细胞周期标志物—PCNA 的结构功能 | 第22-26页 |
| 四 获得基因全长的方法 | 第26-27页 |
| 五 实时荧光定量PCR 技术 | 第27-37页 |
| 引言 | 第37-38页 |
| 第一章 中肋骨条藻 RNA 几种提取方法的比较 | 第38-44页 |
| ·实验材料 | 第38-39页 |
| ·微藻的培养 | 第38页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-41页 |
| ·提取方法1 | 第40页 |
| ·提取方法2 | 第40页 |
| ·提取方法3 | 第40-41页 |
| ·提取方法4 | 第41页 |
| ·提取方法5 | 第41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-44页 |
| 第二章 中肋骨条藻 PCNA 基因的克隆与序列分析 | 第44-57页 |
| ·实验材料与方法 | 第44-51页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·RT-PCR及其产物的克隆测序 | 第45-49页 |
| ·3’RACE | 第49-51页 |
| ·系统关系分析 | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-57页 |
| ·RT-PCR 扩增及克隆结果 | 第51-53页 |
| ·3’RACE 扩增结果 | 第53-54页 |
| ·测序结果 | 第54-55页 |
| ·系统关系分析 | 第55-57页 |
| 第三章 中肋骨条藻 PCNA 基因实时荧光定量 PCR 检测方法的建立 | 第57-69页 |
| ·实验材料与方法 | 第57-61页 |
| ·实验材料 | 第57-58页 |
| ·质粒标准样品的制备 | 第58-59页 |
| ·RFQ-PCR 标准曲线的建立 | 第59页 |
| ·标准曲线准确性的验证 | 第59页 |
| ·稳定性检验 | 第59-60页 |
| ·特异性检验 | 第60页 |
| ·不同生长期中肋骨条藻的PCNA基因检测 | 第60-61页 |
| ·结果 | 第61-67页 |
| ·质粒提取和酶切 | 第61页 |
| ·荧光定量PCR 标准曲线的建立 | 第61-63页 |
| ·标准曲线的可靠性 | 第63-64页 |
| ·RNA 提取和RT-PCR 体系稳定性的验证 | 第64-65页 |
| ·特异性验证 | 第65-66页 |
| ·不同培养阶段中肋骨条藻的PCNA 基因表达量检测 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 第四章 中肋骨条藻cytochrome b 基因的序列分析及其 RFQ-PCR 检测方法的建立 | 第69-79页 |
| ·材料与方法 | 第69-71页 |
| ·Cyt b 基因扩增引物的设计 | 第69页 |
| ·RNA 提取与RT-PCR | 第69-70页 |
| ·克隆与测序 | 第70页 |
| ·RFQ-PCR 标准曲线的建立 | 第70-71页 |
| ·标准曲线准确性的验证 | 第71页 |
| ·结果与讨论 | 第71-79页 |
| ·Cyt b 基因扩增及产物纯化 | 第71-72页 |
| ·质粒酶切 | 第72-73页 |
| ·Cyt b 基因测序 | 第73-74页 |
| ·藻类Cyt b 基因系统学分析 | 第74-75页 |
| ·Cyt b 基因荧光定量PCR 标准曲线的建立 | 第75-77页 |
| ·标准曲线的可靠性 | 第77-79页 |
| 第五章 中肋骨条藻生长率与 PCNA 基因相对表达量关系的研究 | 第79-94页 |
| ·材料与方法 | 第79-81页 |
| ·主要仪器 | 第79页 |
| ·中肋骨条藻的培养 | 第79-80页 |
| ·藻的计数与收集 | 第80页 |
| ·PCNA 与Cyt b 基因的测定 | 第80-81页 |
| ·结果 | 第81-89页 |
| ·藻的生长曲线 | 第81-82页 |
| ·第一组实验中不同生长阶段PCNA 基因相对表达量与生长率关系 | 第82-84页 |
| ·第二组实验中PCNA 基因相对表达量与生长率关系 | 第84-86页 |
| ·不同培养条件下生长率和REQ 的关系 | 第86-89页 |
| ·讨论 | 第89-94页 |
| ·PCNA 作为细胞分裂增值指标的潜能 | 第89页 |
| ·Cyt b 作为内参基因的可行性 | 第89-90页 |
| ·PCNA 相对表达量计算方法的建立 | 第90-91页 |
| ·不同培养条件下 REQ 与生长率μ的关系 | 第91-94页 |
| 总结 | 第94-95页 |
| 展望 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-107页 |
| 附录 | 第107-124页 |
| 发表文章及发明专利 | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
