摘要 | 第1-5页 |
ABSTRACT | 第5-11页 |
前言 | 第11-14页 |
第一章 鸡Toll样受体7基因序列的克隆 | 第14-32页 |
1.材料和方法 | 第14-23页 |
·材料 | 第14-17页 |
·主要仪器 | 第14页 |
·实验用动物和饲料 | 第14-15页 |
·菌株、载体 | 第15页 |
·分子生物学试剂和试剂盒 | 第15页 |
·培养基 | 第15-16页 |
·引物 | 第16页 |
·鸡脾脏(法氏囊)淋巴细胞分离用材料 | 第16页 |
·总RNA抽提用材料 | 第16页 |
·CaCl_2法转化用材料 | 第16页 |
·琼脂糖凝胶电泳材料 | 第16-17页 |
·方法 | 第17-23页 |
·鸡脾脏(法氏囊)淋巴细胞的分离 | 第17页 |
·鸡脾脏(法氏囊)淋巴细胞总RNA的抽提 | 第17-18页 |
·RT-PCR扩增ChTLR7基因片段 | 第18-19页 |
·RT-PCR产物的回收纯化 | 第19-20页 |
·chTLR7RT-PCR产物与pGEM-T-easy的连接 | 第20页 |
·连接产物(chTLR7)转化入E.coliDH5α(CaCl_2法) | 第20-21页 |
·转化克隆的PCR鉴定 | 第21-22页 |
·chTLR7 PCR阳性克隆的序列测定及分析 | 第22-23页 |
2.结果 | 第23-29页 |
·chTLR7的RT-PCR扩增结果 | 第23页 |
·转化菌落的PCR鉴定 | 第23-24页 |
·chTLR7基因序列分析 | 第24-29页 |
3.讨论 | 第29-30页 |
参考文献 | 第30-32页 |
第二章 半定量RT-PCR检测chTLR7mRNA表达水平 | 第32-53页 |
1.材料和方法 | 第32-38页 |
·材料 | 第32-33页 |
·主要仪器 | 第32页 |
·实验用动物及饲料 | 第32页 |
·法贝灵 | 第32页 |
·常用分子生物学试剂和试剂盒 | 第32页 |
·培养基及配制 | 第32页 |
·chβ-actin引物 | 第32页 |
·鸡脾脏和法氏囊淋巴细胞分离用材料 | 第32页 |
·总RNA抽提用材料 | 第32页 |
·CaCl_2法转化用材料 | 第32-33页 |
·琼脂糖凝胶电泳材料 | 第33页 |
·方法 | 第33-38页 |
·动物分组 | 第33页 |
·动物模型的制备 | 第33页 |
·鸡脾脏和法氏囊淋巴细胞的分离 | 第33页 |
·鸡脾脏和法氏囊淋巴细胞总RNA的抽提 | 第33页 |
·RT-PCR扩增chβ-actin基因 | 第33-35页 |
·RT-PCR产物的回收纯化 | 第35页 |
·RT-PCR产物与pUCm-T载体的连接 | 第35-36页 |
·连接产物(chβ-actin)转化E.coli5α(CaCl_2法) | 第36页 |
·chβ-actin转化克隆的PCR鉴定 | 第36-37页 |
·chβ-actin阳性克隆的序列测定及分析 | 第37页 |
·实验鸡脾脏和法氏囊组织淋巴细胞chTLR7 mRNA表达水平的 | 第37页 |
·统计学处理 | 第37-38页 |
2.结果 | 第38-50页 |
·chβ-actin的RT-PCR扩增结果 | 第38-39页 |
·chβ-actin基因序列分析 | 第39页 |
·循环数对PCR产物灰度的影响 | 第39-40页 |
·脾脏、法氏囊组织中chTLR7 mRNA表达水平的PCR鉴定 | 第40-47页 |
·脾脏、法氏囊组织中chTLR7mRNA表达水平的变化 | 第47-50页 |
3.讨论 | 第50-53页 |
参考文献 | 第53-54页 |
小结 | 第54-55页 |
文献综述 | 第55-69页 |
参考文献 | 第66-69页 |
附录 | 第69-79页 |
附录1:缩写词表及英汉对照 | 第69-70页 |
附录2:GenBank登陆的ChTLR7基因的序列 | 第70-73页 |
附录3:GenBank登陆的chβ-actin基因序列 | 第73-75页 |
附录4:质粒pGEM-T-easy图谱 | 第75-76页 |
附录5:质粒pUCm-T载体图谱 | 第76-77页 |
附录6:chTLR7基因克隆入pPGEM-easy载体的测序结果chβ-actin基因克隆入pUCm-T载体的测序结果 | 第77-79页 |
致谢 | 第79-81页 |