| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-27页 |
| 1 基因差异表达与杂种优势 | 第14-19页 |
| ·杂种与亲本间基因差异表达模式 | 第14-15页 |
| ·基因差异表达模式与杂种优势的关系 | 第15-16页 |
| ·杂交种与亲本之间差异表达基因与杂种优势及其分离 | 第16-17页 |
| ·蛋白质差异与杂种优势 | 第17-18页 |
| ·甲基化与杂种优势 | 第18-19页 |
| 2 基因差异表达的研究方法 | 第19-25页 |
| ·消减杂交法(Subtractive Hybridization) | 第19-20页 |
| ·mRNA差异显示(mRNA Differential Display) | 第20页 |
| ·代表性序列差异分析(Representation Difference Analysis, RDA) | 第20-21页 |
| ·cDNA-AFLP(cDNA Amplified fragment length polymorphism) | 第21-22页 |
| ·基因表达系统分析(Serial Analysis of Gene Expression, SAGE) | 第22-23页 |
| ·抑制消减杂交(Suppression Subtractive Hybridization, SSH) | 第23-24页 |
| ·cDNA微阵列(cDNA microassay) | 第24-25页 |
| 3 研究目的与意义 | 第25-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-46页 |
| 1 主要仪器与设备 | 第27-28页 |
| 2 试剂盒、试剂、载体及菌株 | 第28-29页 |
| ·试剂盒 | 第28页 |
| ·试剂和酶 | 第28页 |
| ·载体及菌株 | 第28-29页 |
| 3 实验样品 | 第29页 |
| ·组织样 | 第29页 |
| ·猪群和DNA样 | 第29页 |
| 4 实验方法 | 第29-46页 |
| ·肌肉组织总RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·背最长肌mRNA的分离 | 第30-31页 |
| ·配制母液 | 第30页 |
| ·探针退火 | 第30页 |
| ·清洗磁珠 | 第30-31页 |
| ·清洗与捕获Oligo(dT)-mRNA杂交体 | 第31页 |
| ·洗脱mRNA | 第31页 |
| ·沉淀与浓缩mRNA | 第31页 |
| ·检测mRNA的纯度与浓度 | 第31页 |
| ·SMART cDNA的合成 | 第31-33页 |
| ·抑制消减杂交 | 第33-39页 |
| ·Driver cDNA和Tester cDNA的制备 | 第33-36页 |
| ·接头连接效率的检测 | 第36-37页 |
| ·消减杂交 | 第37页 |
| ·PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·消减效率的检测 | 第38-39页 |
| ·消减文库的构建 | 第39-40页 |
| ·载体连接 | 第39页 |
| ·细菌转化 | 第39-40页 |
| ·消减cDNA文库的筛选 | 第40-42页 |
| ·PCR筛选 | 第40页 |
| ·斑点杂交筛选阳性克隆 | 第40-42页 |
| ·阳性克隆cDNA片段测序及序列分析 | 第42页 |
| ·RT-PCR检验差异表达基因 | 第42页 |
| ·背最长肌总RNA的提取 | 第42页 |
| ·RT-PCR反应 | 第42页 |
| ·差异基因全长cDNA克隆及序列分析 | 第42-44页 |
| ·电子延伸 | 第42-43页 |
| ·RACE-PCR | 第43页 |
| ·RACE-PCR产物的回收和纯化 | 第43-44页 |
| ·克隆和测序 | 第44页 |
| ·序列分析 | 第44页 |
| ·差异基因组织表达分析 | 第44-45页 |
| ·RNA的制备 | 第44-45页 |
| ·RT-PCR反应 | 第45页 |
| ·差异基因的基因组结构分析和序列克隆 | 第45页 |
| ·多态性分析和SNP研究 | 第45-46页 |
| 第三章 结果与分析 | 第46-104页 |
| 1 背最长肌组织总RNA的提取 | 第46页 |
| 2 抑制消减杂交 | 第46-49页 |
| ·Driver cDNA和Tester cDNA的制备 | 第46-48页 |
| ·消减杂交、抑制性PCR和消减效率的检测 | 第48-49页 |
| 3 消减cDNA文库的构建和筛选 | 第49-54页 |
| ·消减cDNA文库的构建和PCR筛选 | 第49-50页 |
| ·斑点杂交筛选 | 第50页 |
| ·阳性克隆测序及序列分析 | 第50-53页 |
| ·基因差异表达的RT-PCR验证 | 第53-54页 |
| 4 差异基因的克隆、序列分析、表达谱及部分基因组研究 | 第54-104页 |
| ·MS140(PPP1CB: protein phosphatase 1, catalytic subunit, beta isoform) | 第54-62页 |
| ·基因MS140 cDNA的克隆 | 第54-55页 |
| ·基因MS140的序列分析 | 第55-60页 |
| ·组织表达谱研究 | 第60页 |
| ·部分基因组序列的克隆与SNP研究 | 第60-62页 |
| ·MS545(signal peptidase 12 kDa subunit, SPC12) | 第62-67页 |
| ·基因MS545 cDNA的克隆 | 第62页 |
| ·序列分析 | 第62-66页 |
| ·组织表达谱研究 | 第66页 |
| ·基因组序列的克隆与分析 | 第66-67页 |
| ·MS138(downregulated in ovarian cancer 1, DOC1) | 第67-75页 |
| ·基因MS138 cDNA的克隆 | 第67-68页 |
| ·基因MS138的序列分析 | 第68-74页 |
| ·组织表达谱研究 | 第74-75页 |
| ·DM413(Eukaryotic translation initiation factor 4E, EIF4E) | 第75-79页 |
| ·基因DM413 cDNA的克隆 | 第75页 |
| ·序列分析 | 第75-79页 |
| ·组织表达谱研究 | 第79页 |
| ·DM288(small inducible cytokine subfamily E, member 1, SCYE1) | 第79-84页 |
| ·基因DM288 cDNA的克隆 | 第79-80页 |
| ·基因DM288的序列分析 | 第80-83页 |
| ·组织表达谱研究 | 第83-84页 |
| ·部分基因组序列的克隆与SNP研究 | 第84页 |
| ·MS198(zinc finger, A20 domain containing 2, ZA20D2) | 第84-89页 |
| ·基因MS198 cDNA的克隆 | 第84-85页 |
| ·基因MS198的序列分析 | 第85-89页 |
| ·组织表达谱研究 | 第89页 |
| ·MS345(ribosomal protein L5, RPL5) | 第89-94页 |
| ·基因MS345 cDNA的克隆 | 第89-90页 |
| ·基因MS345的序列分析 | 第90-93页 |
| ·组织表达谱研究 | 第93-94页 |
| ·MS552(sarcolipin,SLN) | 第94-97页 |
| ·基因MS552 cDNA的克隆 | 第94页 |
| ·基因MS552的序列分析 | 第94-96页 |
| ·组织表达谱研究 | 第96-97页 |
| ·基因组序列的克隆与SNP研究 | 第97页 |
| ·DM537(cytochrome c oxidase subunit Ⅶc, COXTc) | 第97-104页 |
| ·基因DM537 cDNA的克隆 | 第97-98页 |
| ·基因DM537的序列分析 | 第98-100页 |
| ·组织表达谱研究 | 第100-101页 |
| ·基因组序列的克隆与SNP研究 | 第101-104页 |
| 第四章 讨论 | 第104-120页 |
| 1 关于抑制消减杂交技术 | 第104-106页 |
| 2 差异基因的高通量筛选 | 第106页 |
| 3 关于半定量RT-PCR | 第106-107页 |
| 4 EST的电子克隆与ORF序列的获取 | 第107-108页 |
| 5 关于PCR引物的设计 | 第108-110页 |
| 6 关于差异表达基因 | 第110-118页 |
| ·PPP1CB(Protein phosphatase 1, catalytic subunit, beta isoform) | 第110-111页 |
| ·COXTC(Cytochrome c oxidase Ⅶc) | 第111-113页 |
| ·SLN(Sarcolipin) | 第113-114页 |
| ·RPL5(Ribosomal protein L5) | 第114-115页 |
| ·SPC12(Signal peptidase 12 kDa subunit) | 第115-116页 |
| ·EIF4E(Eukaryotic translation initiation factor 4E) | 第116-117页 |
| ·ZA20D2(Zinc finger protein, A20 domain containing 2) | 第117-118页 |
| ·DOC1(Downregulated in ovarian cancer 1)和SCYE1(Small inducible cytokine subfatally E, member 1) | 第118页 |
| 7 关于猪新基因与其他物种基因组和氨基酸的保守性 | 第118页 |
| 8 关于SNP位点 | 第118-119页 |
| 9 关于下一步的工作 | 第119-120页 |
| 小结 | 第120-121页 |
| 参考文献 | 第121-132页 |
| 附录 | 第132-134页 |
| 用于表达分析的引物 | 第132-133页 |
| 基因克隆引物 | 第133-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
