| 前言 | 第1-27页 |
| 1 RNA 沉默简介 | 第7-10页 |
| 2 RNA 沉默是一种植物固有的抗病毒防卫反应 | 第10-12页 |
| 3 RNA 沉默抑制子的发现和多样性 | 第12-17页 |
| ·RNA 沉默抑制子的发现和已鉴定的沉默抑制子 | 第12-14页 |
| ·沉默抑制子的鉴定方法 | 第14-17页 |
| ·病毒载体表达和整株植物中转基因诱导的基因沉默的回复 | 第14-15页 |
| ·农杆菌共浸润瞬时抑制试验 | 第15-16页 |
| ·转基因植物的杂交和嫁接试验 | 第16-17页 |
| 4 沉默抑制子的作用方式和抑制沉默的分子机理 | 第17-22页 |
| ·马铃薯Y 病毒属的HC-Pro 干扰RISC 的形成 | 第18-20页 |
| ·蕃茄丛矮病毒属的P19 阻碍siRNA 整合入RISC | 第20-21页 |
| ·CMV 2b 干扰沉默信号的长距离移动 | 第21-22页 |
| 5 沉默抑制子与病毒病症状形成的关系 | 第22-24页 |
| 6 沉默抑制子的应用 | 第24-27页 |
| ·解析RNA 沉默的途径 | 第24-26页 |
| ·增强外源蛋白的表达 | 第26-27页 |
| 实验部分 | 第27-65页 |
| 第一章 材料与方法 | 第27-47页 |
| 1 材料 | 第27-28页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·菌株和质粒 | 第27页 |
| ·试剂和仪器 | 第27-28页 |
| 2 方法 | 第28-47页 |
| ·PCR 技术 | 第28-30页 |
| ·普通PCR 反应 | 第28-29页 |
| ·Overlap-PCR | 第29-30页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第30-32页 |
| ·DNA 克隆技术 | 第32-36页 |
| ·连接 | 第32-33页 |
| ·感受态细胞制备 | 第33-35页 |
| ·电击转化 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第36-40页 |
| ·碱裂解法 | 第36-37页 |
| ·质粒微量提取试剂盒 | 第37-39页 |
| ·PCR 鉴定(菌落PCR) | 第39-40页 |
| ·酶切鉴定 | 第40页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的表达、蛋白质纯化和抗体制备 | 第40-43页 |
| ·诱导表达 | 第40-41页 |
| ·表达产物在变性条件下的纯化 | 第41页 |
| ·GST 融合蛋白的亲和层析纯化 | 第41-42页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE 与Western 印迹分析 | 第43-47页 |
| ·植物可溶性蛋白样品的制备 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE | 第43-44页 |
| ·电转移(半干转) | 第44-45页 |
| ·Western 印迹分析 | 第45-47页 |
| 第二章 | 第47-56页 |
| 1 材料和方法 | 第48-53页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·载体和菌株 | 第48页 |
| ·酶与试剂 | 第48-49页 |
| ·SD2b 的全基因合成 | 第49-52页 |
| ·诱导表达和蛋白纯化 | 第52页 |
| ·抗体制备和Western 印迹 | 第52-53页 |
| 2 结果分析 | 第53-56页 |
| ·利用pGEX-2T-1 载体在大肠杆菌中表达GST 融合蛋白 | 第53-56页 |
| 第三章 | 第56-65页 |
| 1 材料和方法 | 第57-60页 |
| ·植物材料 | 第57页 |
| ·重组抑制子构建 | 第57-59页 |
| ·农杆菌浸润接种( Agroinfiltration ) | 第59页 |
| ·农杆菌瞬时表达沉默又到体系的建立 | 第59-60页 |
| ·GFP 荧光观察和拍照 | 第60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 摘要 | 第70-72页 |
| Summary | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74-79页 |
