| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-12页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-44页 |
| ·RNAi及发现 | 第13页 |
| ·双链RNA(dsRNA)的生化性质 | 第13-14页 |
| ·RNAi的一些作用机制模型 | 第14-16页 |
| ·RNAi生理作用及可能的用途 | 第16-17页 |
| ·RNAi的作用特点 | 第17-18页 |
| ·siRNA的设计及制备 | 第18-21页 |
| ·siRNA的设计 | 第18页 |
| ·siRNA的制备 | 第18-21页 |
| ·HBV及其相关的疾病 | 第21-33页 |
| ·HBV分子生物学及其研究进展 | 第21-29页 |
| ·肝脏是嗜肝DNA病毒感染的靶器官 | 第29-33页 |
| ·HCC的分子病理学 | 第33-37页 |
| ·HBV病毒基因在HCC形成过程中的作用 | 第36-37页 |
| ·HIV及相关疾病 | 第37-42页 |
| ·HIV生物学特征 | 第37-41页 |
| ·HIV的致病机理 | 第41页 |
| ·HIV流行病学 | 第41-42页 |
| ·AIDS的治疗进展 | 第42页 |
| ·HBV和HIV混合感染 | 第42-43页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第43-44页 |
| 第二章 利用载体产生siRNA来抑制HBV的基因表达和复制 | 第44-72页 |
| ·引言 | 第44-46页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·菌种、细胞和质粒 | 第46页 |
| ·工具酶 | 第46页 |
| ·试剂盒 | 第46-47页 |
| ·方法 | 第47-61页 |
| ·RNA干扰靶序列的选择 | 第47页 |
| ·siRNA表达质粒的构建 | 第47-53页 |
| ·细胞培养、冻存和复苏 | 第53-55页 |
| ·转染细胞 | 第55-56页 |
| ·plucF-HBs和plucF-HBx融合质粒的构建 | 第56页 |
| ·荧光色素酶的测定 | 第56页 |
| ·乙型肝炎表面抗原的检测 | 第56-57页 |
| ·总RNA的提取和RT-PCR检测 | 第57-59页 |
| ·肝病毒复制中间体(core associated DNA)荧光定量PCR检测 | 第59-61页 |
| ·结果 | 第61-71页 |
| ·选择siRNA靶位点在HBV基因组及主要mRNA中的位置 | 第61页 |
| ·融合基因plucF-HBs和plucF-HBx构成示意图 | 第61-62页 |
| ·产生siRNA的模板 | 第62页 |
| ·表达siRNA的质粒构建 | 第62-63页 |
| ·小分子干扰RNA(siRNA)示意图 | 第63页 |
| ·荧光色素酶活性的定量分析 | 第63-65页 |
| ·用RT-PCR检测siRNA对HBS和HBX基因表达的影响 | 第65-67页 |
| ·乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的测定 | 第67-70页 |
| ·siRNA对HBV复制的影响 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-72页 |
| 第三章 利用同一载体同时产生两个siRNA抑制HBV复制 | 第72-80页 |
| ·引言 | 第72页 |
| ·材料和方法 | 第72页 |
| ·方法 | 第72-73页 |
| ·同时产生两个siRNA的质粒构建 | 第72-73页 |
| ·荧光素酶分析 | 第73页 |
| ·RT-PCR分析 | 第73页 |
| ·HBsAg检测 | 第73页 |
| ·HBV DNA和HBV复制中间体的荧光定量PCR检测 | 第73页 |
| ·结果 | 第73-79页 |
| ·产生双siRNA质粒的构建 | 第73-74页 |
| ·用荧光素酶分析检测HBx siRNA对HBs和HBx表达的影响 | 第74-75页 |
| ·用RT-PCR检测HBsxsiRNA对HBs和HBx表达的影响 | 第75-76页 |
| ·检测HBsxsiRNA对HBV的影响 | 第76-78页 |
| ·HBV DNA和HBV复制中间体的荧光定量PCR检测结果 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-80页 |
| 第四章 双siRNA同时抑制HBV和HIV病毒基因的表达和复制 | 第80-95页 |
| ·引言 | 第80页 |
| ·材料 | 第80-81页 |
| ·方法 | 第81-88页 |
| ·针对HIV-1gp120有效的siRNA作用的靶位点的筛选 | 第81-86页 |
| ·同时产生两个siRNA的质粒构建 | 第86-87页 |
| ·荧光素酶分析 | 第87页 |
| ·RT-PCR分析 | 第87页 |
| ·HBsAg检测 | 第87页 |
| ·HBV DNA和HBV复制中间体的荧光定量PCR检测 | 第87页 |
| ·HBV-HIVsiRNA对HIV-1复制影响的检测 | 第87-88页 |
| ·结果 | 第88-93页 |
| ·产生双siRNA质粒的构建 | 第88页 |
| ·用荧光素酶分析检测HIVsiRNA对HBs和HIVgp120表达的影响 | 第88-89页 |
| ·乙型肝炎表面抗原的检测 | 第89-90页 |
| ·用RT-PCR检测HBV-HIVsiRNA对HBs和HIVgp120表达的影响 | 第90-91页 |
| ·HBV DNA和HBV复制中间体的荧光定量PCR检测结果 | 第91-92页 |
| ·HBV-HIVsiRNA对HIV-1复制影响的检测 | 第92-93页 |
| ·讨论 | 第93-95页 |
| 第五章 总结和展望 | 第95-98页 |
| 参考文献 | 第98-120页 |
| 附录Ⅱ 论文涉及的试剂及其配制 | 第120-123页 |
| 附录Ⅲ 在读期间发表的文章 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
