| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 第一部分 基于生物活性筛选的土贝母有效成分的分离纯化研究 | 第15-23页 |
| 一、 土贝母活性成分的分离纯化 | 第15-22页 |
| 1 材料与方法 | 第16-19页 |
| ·药材 | 第16页 |
| ·仪器与试剂 | 第16-17页 |
| ·细胞毒活性检验方法 | 第17页 |
| ·不同部位提取分离 | 第17-18页 |
| ·树脂层析分离 | 第18页 |
| ·薄层层析检测方法 | 第18页 |
| ·硅胶柱层析分离 | 第18-19页 |
| ·制备型高效液相色谱(HPLC)分离 | 第19页 |
| 2 结 果 | 第19-22页 |
| 3 讨 论 | 第22页 |
| 参考文献 | 第22-23页 |
| 第二部分 土贝母化学成分的结构解析 | 第23-53页 |
| 一、 土贝母化学成分的结构解析 | 第24-52页 |
| 1 仪器与方法 | 第25页 |
| ·仪器 | 第25页 |
| ·测定条件 | 第25页 |
| 2 结构解析 | 第25-48页 |
| ·化合物1的红外、紫外光谱 | 第25-27页 |
| ·化合物1的MS、1H NMR和13C NMR谱 | 第27-32页 |
| ·化合物1的 1H-1H COSY和 1H-1H TOCSY谱 | 第32-34页 |
| ·化合物1的HMQC和HMBC谱 | 第34-39页 |
| ·化合物2、4的结构解析 | 第39-40页 |
| ·化合物3的结构解析 | 第40-48页 |
| 3 讨 论 | 第48-52页 |
| 参考文献 | 第52-53页 |
| 第三部分 中药土贝母有效成分抗恶性肿瘤实验 | 第53-69页 |
| 一、 土贝母皂苷甲、丙对肿瘤细胞的增殖抑制效应 | 第54-65页 |
| 材料与方法 | 第55-56页 |
| 1 材料与试剂 | 第55页 |
| 2 方法 | 第55-56页 |
| ·MTT法检测土贝母皂苷甲、丙对肿瘤细胞的增殖抑制 | 第55-56页 |
| ·土贝母皂苷甲、丙对细胞周期的影响 | 第56页 |
| 结果 | 第56-64页 |
| 1 土贝母皂苷对对肿瘤细胞增殖抑制的影响 | 第56-59页 |
| 2 土贝母皂苷对SW480细胞周期的影响 | 第59-61页 |
| 3 土贝母皂苷对A549细胞周期的影响 | 第61-62页 |
| 4 土贝母皂苷甲、丙对非肿瘤细胞的影响 | 第62-64页 |
| 讨论 | 第64-65页 |
| 二、 土贝母皂苷甲、丙对荷瘤小鼠肿瘤抑制试验及急性毒性实验 | 第65-68页 |
| 1 对接种S180瘤株的昆明小鼠的抑制试验 | 第65-66页 |
| 2 对接种肝癌细胞株(H22)的昆明小鼠的抑制试验 | 第66页 |
| 3 土贝母皂苷丙的急性毒性试验 | 第66-68页 |
| 4 讨 论 | 第68页 |
| 参考文献 | 第68-69页 |
| 第四部分 土贝母有效成分抗肿瘤作用的机理研究 | 第69-98页 |
| 一、 土贝母皂苷对K562细胞的诱导分化研究 | 第69-81页 |
| 材料与方法 | 第70-72页 |
| 1 材 料 | 第70-71页 |
| 2 实验方法 | 第71-72页 |
| ·冻存细胞的复苏与培养 | 第71页 |
| ·药物处理与细胞培养观察 | 第71页 |
| ·K562细胞糖原(PAS)细胞化学检测 | 第71页 |
| ·K562细胞髓过氧化物酶(MPO)细胞化学检测 | 第71-72页 |
| ·K562细胞非特异性酯酶(α-NAE)检测 | 第72页 |
| ·流式细胞仪分析药物对细胞周期的影响 | 第72页 |
| 结 果 | 第72-78页 |
| 1 土贝母皂苷丙作用时间与抑制细胞增殖的关系 | 第72-73页 |
| 2 土贝母皂苷丙对K562细胞形态的影响 | 第73-74页 |
| 3 细胞周期分析结果 | 第74-76页 |
| 4 细胞化学分析结果 | 第76-78页 |
| 讨 论 | 第78-80页 |
| 1 土贝母皂苷丙对K562细胞的增殖抑制作用 | 第78-79页 |
| 2 土贝母皂苷丙对K562细胞的细胞形态的影响 | 第79页 |
| 3 土贝母皂苷丙对K562细胞周期的影响 | 第79页 |
| 4 土贝母皂苷丙对K562细胞内标志物表达的影响 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-81页 |
| 二、 土贝母皂苷对SW480的细胞凋亡及细胞形态的影响 | 第81-92页 |
| 材料和方法 | 第82-83页 |
| 1 细胞株 | 第82页 |
| 2 实验试剂 | 第82页 |
| 3 实验仪器 | 第82页 |
| 4 细胞培养 | 第82-83页 |
| 5 流式细胞仪检测 | 第83页 |
| 6 光镜和电子显微镜下检测细胞形态 | 第83页 |
| 结 果 | 第83-89页 |
| 1 细胞凋亡检测结果 | 第83-85页 |
| 2 土贝母皂苷对细胞形态影响 | 第85-89页 |
| 讨 论 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-92页 |
| 三、 免疫细胞化学法(SP)检测BCL-2、P53、Fas基因表达 | 第92-98页 |
| 材料与方法 | 第93-94页 |
| 1 细胞: | 第93页 |
| 2 药物与试剂 | 第93页 |
| 3 细胞培养与药物处理 | 第93页 |
| 4 组织化学方法 | 第93-94页 |
| 5 统计学方法 | 第94页 |
| 结 果 | 第94-95页 |
| 讨 论 | 第95-97页 |
| 1 土贝母皂苷丙对SW480细胞中Bcl-2 蛋白表达的影响 | 第95-96页 |
| 2 土贝母皂苷丙对SW480细胞中P53 基因表达的影响 | 第96页 |
| 3 土贝母皂苷丙对SW480细胞中Fas 基因表达的影响 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-98页 |
| 总 结 | 第98-100页 |
| 文献综述 | 第100-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及发明专利申请 | 第117页 |
