| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 第一章 花生钙调蛋白基因克隆及表达载体构建 | 第9-51页 |
| 前言 | 第9-19页 |
| 1 植物钙调素的研究进展 | 第9-15页 |
| 2 基因克隆方法研究进展 | 第15-18页 |
| 3 本研究的目的意义和主要内容 | 第18-19页 |
| 材料与方法 | 第19-28页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第19页 |
| ·花生材料 | 第19页 |
| ·菌株与质粒载体 | 第19页 |
| ·试验所用主要试剂 | 第19页 |
| ·试验所用主要仪器 | 第19页 |
| 2 研究方法 | 第19-28页 |
| ·花生幼嫩叶片核酸的提取 | 第19-21页 |
| ·总RNA的提取 | 第19-20页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第20-21页 |
| ·总核酸提取质量的检测 | 第21页 |
| ·目的片段的获得 | 第21-22页 |
| ·RT-PeR获得cDNA | 第21-22页 |
| ·基因组DNA的扩增 | 第22页 |
| ·目的片段的克隆及筛选鉴定 | 第22-26页 |
| ·cDNA及DNA特异片段的回收 | 第22-23页 |
| ·将回收的目的基因片段连接到克隆载体上 | 第23页 |
| ·Ecoli感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·目的片段的转化 | 第24页 |
| ·Ecoli质粒DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的PCR及酶切鉴定分析 | 第25-26页 |
| ·测序及同源比较 | 第26页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第26-28页 |
| ·反义核酸表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·正义核酸表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 结果与分析 | 第28-51页 |
| 1 CaMcDNA的分离与克隆 | 第28-34页 |
| ·花生CaMcDNA片段的分离 | 第28-29页 |
| ·花生CaM基因cDNA片段的克隆和鉴定 | 第29-30页 |
| ·花生CaMcDNA及相应氨基酸序列的比较 | 第30-34页 |
| 2 花生CaM基因组DNA的分离与克隆 | 第34-42页 |
| ·花生基因组DNA的提取 | 第34页 |
| ·从花生基因组DNA分离CaM基因 | 第34-35页 |
| ·CaM基因片段的克隆和筛选鉴定 | 第35-37页 |
| ·目的片段的序列及分析 | 第37-42页 |
| ·目的片段PGCaM-3的序列 | 第37页 |
| ·目的片段PGCaM-1的序列分析 | 第37页 |
| ·CaM基因间的核苷酸及相应氨基酸序列分析与同源性的综合比较 | 第37-42页 |
| 3 植物表达载体的构建 | 第42-44页 |
| ·CaMcDNA反义链表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·质粒PCGeneral及含PCaM-1插入片段的质粒载体的提取 | 第42页 |
| ·载体与反义CaM基因的连接、转化及鉴定 | 第42-43页 |
| ·CaMcDNA表达链构建表达载体 | 第43-44页 |
| ·pEGAD表达载体和供体片段的获得 | 第43-44页 |
| ·载体和供体片段的连接、转化及鉴定 | 第44页 |
| 4 讨论 | 第44-51页 |
| ·花生CaM基因序列之间的比较与分析 | 第44-45页 |
| ·花生CaM基因可能的功能差异 | 第45-47页 |
| ·CaMDNA基因序列的功能差异 | 第46页 |
| ·CaMcDNA基因序列的功能差异 | 第46-47页 |
| ·构建表达载体以揭示钙调控胚发育机理的可行性 | 第47-48页 |
| ·花生CaM基因组DNAPCR的问题及解决办法 | 第48-51页 |
| ·关于TD-PCR的优化 | 第48-49页 |
| ·DNA模板对PCR的影响 | 第49-51页 |
| 第二章 钙调控幼胚离体培养为成熟胚的研究 | 第51-64页 |
| 前言 | 第51-58页 |
| 1 花生组织培养研究进展 | 第51-53页 |
| 2 离体胚组织培养的应用进展 | 第53-57页 |
| 3 本研究目的意义及主要内容 | 第57-58页 |
| 材料与方法 | 第58-59页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·培养基类型 | 第58页 |
| ·灭菌方法 | 第58页 |
| ·外植体类型 | 第58页 |
| ·培养条件 | 第58-59页 |
| 结果与分析 | 第59-60页 |
| ·钙离子浓度对胚胎发育的影响 | 第59页 |
| ·胚龄对胚胎培养的影响 | 第59页 |
| ·不同外植体类型的培养差异 | 第59-60页 |
| ·胚珠为外植体的培养 | 第59页 |
| ·顶端有切口的胚珠培养 | 第59-60页 |
| ·幼胚为材料的胚培养 | 第60页 |
| 讨论 | 第60-64页 |
| ·钙离子水平对胚发育的影响 | 第60页 |
| ·培养基凝固剂的影响 | 第60-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 附录Ⅰ 缩写词汇对照表 | 第72-73页 |
| 附录Ⅱ 本实验所用相关试剂 | 第73-74页 |
| 附录Ⅲ 克隆载体图谱 | 第74-75页 |
| 附录Ⅳ 表达载体图谱 | 第75-76页 |
| 附录Ⅴ 花生PCaM-1基因的反义表达载体构建流程图 | 第76-77页 |
| 附录Ⅵ 花生PCaM-1基因的反义表达载体构建流程图 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
