| 文献综述 胚胎干细胞分化的研究进展及其与心肌损伤性疾病的治疗 | 第1-27页 |
| 1 胚胎干细胞的生物学特征 | 第12-14页 |
| ·ES 细胞的形态学特征 | 第12-13页 |
| ·ES 细胞的高度分化潜能 | 第13页 |
| ·ES 细胞的分子标记 | 第13页 |
| ·ES 细胞显著区别于其他细胞系的几大特征 | 第13-14页 |
| 2 胚胎干细胞定向分化的研究进展 | 第14-23页 |
| ·胚胎干细胞诱导分化的一般方法 | 第14-16页 |
| ·细胞因子诱导法 | 第14-15页 |
| ·选择性标记基因筛选目的细胞法 | 第15页 |
| ·特异性转录因子异位表达法 | 第15页 |
| ·药物及化学试剂诱导法 | 第15-16页 |
| ·胚胎干细胞诱导分化研究概况 | 第16-23页 |
| ·心肌细胞 | 第16-18页 |
| ·神经细胞 | 第18-20页 |
| ·造血细胞 | 第20-21页 |
| ·血管和内皮细胞 | 第21-22页 |
| ·胰岛素分泌细胞 | 第22页 |
| ·脂肪细胞 | 第22-23页 |
| ·向其他细胞和组织定向分化 | 第23页 |
| 3 胚胎干细胞体外定向诱导分化研究存在的问题 | 第23-25页 |
| ·诱导 ES 细胞向某一特定类型细胞分化的技术尚不成熟 | 第23-24页 |
| ·建立无血清培养诱导体系 | 第24页 |
| ·特定分化细胞的扩增 | 第24页 |
| ·分化细胞应用于移植治疗的免疫排斥问题 | 第24页 |
| ·分化细胞应用于移植治疗的安全性问题 | 第24-25页 |
| 4 胚胎干细胞诱导分化研究展望 | 第25页 |
| 5 胚胎干细胞与心肌损伤性疾病的治疗 | 第25-27页 |
| 实验研究 | 第27-47页 |
| 实验一 人类心肌 Α-ACTIN 启动子基因的克隆 | 第27-37页 |
| 1 材料 | 第27-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| ·酶及主要试剂 | 第27-29页 |
| ·实验动物及菌株 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-32页 |
| ·人流产胎儿心肌总 DNA 的提取 | 第29页 |
| ·人类心肌 Α-ACTIN 启动子基因的 PCR 扩增 | 第29页 |
| ·引物的设计与合成 | 第29页 |
| ·人类心肌 α-actin 启动子基因的 PCR 扩增 | 第29页 |
| ·PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳、回收 | 第29-30页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第29-30页 |
| ·PCR 电泳产物的回收 | 第30页 |
| ·人类心肌 Α-ACTIN 启动子基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·pMD18-T-α-actin-P 的构建 | 第30-31页 |
| ·阳性重组质粒的筛选及鉴定 | 第31-32页 |
| ·碱裂解法提取质粒 DNA | 第31-32页 |
| ·酶切鉴定 | 第32页 |
| ·测序 | 第32页 |
| 3 结果 | 第32-33页 |
| ·目的基因的扩增: | 第32页 |
| ·回收后电泳结果 | 第32-33页 |
| ·目的基因的 TA 克隆和筛选 | 第33页 |
| ·测序结果 | 第33页 |
| 4 讨论 | 第33-37页 |
| 实验二 含人类心肌 Α-ACTIN 启动子真核表达载体的构建及其应用 | 第37-47页 |
| 1 材料 | 第37-38页 |
| ·质粒 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37-38页 |
| ·主要仪器设备 | 第38页 |
| ·细胞培养液 | 第38页 |
| ·小鼠胚胎干细胞 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-42页 |
| ·人类 Α-ACTIN 启动子真核表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·pEGFP-N1 中巨细胞病毒启动子的去除 | 第38-39页 |
| ·人类 α-actin 启动子真核表达载体 pEGFP-N1-α-actin-P 的构建 | 第39页 |
| ·含有人类 Α-ACTIN 启动子的 PEGFP-N1-Α-ACTIN-P 质粒纯化 | 第39-40页 |
| ·小鼠胚胎干细胞的制备 | 第40-41页 |
| ·小鼠成纤维细胞的分离与纯化 | 第40-41页 |
| ·小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的制备 | 第41页 |
| ·小鼠胚胎干细胞的培养和增殖 | 第41页 |
| ·转染细胞的筛选与增殖 | 第41-42页 |
| ·转染 | 第41页 |
| ·转染细胞的筛选与增殖 | 第41-42页 |
| ·转染细胞的免疫组化检测 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-44页 |
| ·人类 Α-ACTIN 启动子真核表达载体的构建 | 第42页 |
| ·小鼠 ES 细胞的转染与筛选 | 第42-43页 |
| ·免疫组化结果 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·小鼠 ES 细胞的转染和筛选 | 第45-46页 |
| ·PEGFP-N1-Α-ACTIN-P 重组质粒在小鼠 ES 细胞中的表达 | 第46页 |
| 5 实验中存在的问题 | 第46-47页 |
| 结 论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
