| 缩略词 | 第1-13页 |
| 摘要 | 第13-18页 |
| 第一章 综述 | 第18-31页 |
| 1 植物抗病毒基因工程研究进展 | 第18-22页 |
| ·CP基因介导的病毒抗性 | 第18-19页 |
| ·RP基因介导的病毒抗性 | 第19页 |
| ·MP基因介导的病毒抗性 | 第19-20页 |
| ·反义RNA(antisense RNA)介导的病毒抗性 | 第20页 |
| ·卫星RNA(satellite RNA)介导的病毒抗性 | 第20-21页 |
| ·抗病毒基因工程的其它途径 | 第21-22页 |
| ·抗病毒基因工程的展望 | 第22页 |
| 2 转录后基因沉默与植物病毒对其的抑制 | 第22-28页 |
| ·转录后基因沉默(PTGS) | 第23-25页 |
| ·PTGS发生机制 | 第23-25页 |
| ·PTGS是生物体天然存在的防御机制 | 第25页 |
| ·植物病毒对PTGS的抑制 | 第25-27页 |
| ·病毒对抗植物防御反应的策略:抑制PTGS | 第25-27页 |
| ·植物病毒抑制子对PTGS的抑制机制 | 第27页 |
| ·展望 | 第27-28页 |
| 3 黄瓜花叶病毒研究概况 | 第28-31页 |
| ·黄瓜花叶病毒基因组 | 第29页 |
| ·黄瓜花叶病毒的2b基因 | 第29-31页 |
| 研究报告引言 | 第31-32页 |
| 第二章 黄瓜花叶病毒一步RT-PCR扩增体系的建立 | 第32-42页 |
| 1 材料与方法 | 第32-35页 |
| ·毒源 | 第32-33页 |
| ·CMV毒源 | 第32-33页 |
| ·PVX毒源 | 第33页 |
| ·TuMV毒源 | 第33页 |
| ·病毒样品制备 | 第33页 |
| ·Trizol法提取感染了PVX(pSfinx)烟草的总RNA | 第33-34页 |
| ·利用CMV 2b基因建立一步RT-PCR扩增体系 | 第34页 |
| ·PVX的一步RT-PCR扩增检测及与双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(DAS-ELISA)的比较 | 第34-35页 |
| ·部分十字花科蔬菜作物田间病样TuMV的一步RT-PCR快速检测 | 第35页 |
| ·DNA Marker和产物的检测 | 第35页 |
| 2 结果分析 | 第35-39页 |
| ·一步RT-PCR体系的建立和优化 | 第35-37页 |
| ·利用PVX验证一步RT-PCR体系的稳定性和检测灵敏度 | 第37-39页 |
| ·一步RT-PCR扩增检测部分十字花科蔬菜作物中的TuMV | 第39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 4 小结 | 第41-42页 |
| 第三章 我国部分CMV分离物2b基因片段的序列比较 | 第42-55页 |
| 1 材料与方法 | 第42-47页 |
| ·获得国内不同CMV分离物的2b基因片段(300bp) | 第42-43页 |
| ·RT-PCR产物的克隆 | 第43-46页 |
| ·RT-PCR产物的回收 | 第43-44页 |
| ·RT-PCR产物的克隆 | 第44-45页 |
| ·白斑克隆的鉴定 | 第45-46页 |
| ·2b基因片段的序列测定及其比较 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-53页 |
| ·获得国内不同CMV分离物的2b基因片段 | 第47-48页 |
| ·2b基因RT-PCR产物的克隆及鉴定 | 第48-50页 |
| ·2b序列比较分析 | 第50-53页 |
| 3 讨论 | 第53-54页 |
| 4 小结 | 第54-55页 |
| 第四章 利用PVX侵染性载体分析黄瓜花叶病毒正义和反义2b基因间的相互作用 | 第55-72页 |
| 1 材料与方法 | 第56-59页 |
| ·CMV全长2b基因获得及克隆到T载体 | 第56页 |
| ·CMV全长2b基因PVX(pSfinx)侵染性载体的构建 | 第56-58页 |
| ·目标片段(全长2b基因)的制备 | 第56页 |
| ·目标载体(pSfinx)的制备 | 第56-57页 |
| ·重组克隆的获得与鉴定 | 第57页 |
| ·CMV正义和反义全长2b基因PVX侵染性载体的获得 | 第57-58页 |
| ·pVX2bS和pVX2bAS的侵染性分析 | 第58-59页 |
| ·植物材料 | 第58页 |
| ·菌液准备及摩擦接种 | 第58页 |
| ·接种材料的分子检测 | 第58-59页 |
| ·CMV正义和反义全长2b基因在PVX侵染性载体中的稳定性分析 | 第59页 |
| ·CMV正义和反义2b基因表达间的相互作用 | 第59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-69页 |
| ·CMV全长2b基因片段的获得及克隆到T载体 | 第59-61页 |
| ·全长2b基因片段的获得 | 第59-60页 |
| ·全长2b基因片段克隆到T载体及鉴定 | 第60-61页 |
| ·CMV全长2b基因PVX(pSfinx)侵染性载体的构建 | 第61-63页 |
| ·含全长2b基因的pVX2bS和pVX2bAS载体侵染性分析 | 第63-67页 |
| ·pVX2bS和pVX2bAS载体对不同植物的侵染性分析 | 第63-65页 |
| ·pVX2bS和pVX2bAS侵染SR1的稳定性分析 | 第65-67页 |
| ·CMV正义和反义2b基因表达间的相互作用 | 第67-69页 |
| 3 讨论 | 第69-71页 |
| ·PVX侵染性载体试验寄主植物的选择 | 第69页 |
| ·pVX2bS和pVX2bAS侵染症状的延迟效应 | 第69-70页 |
| ·pVX2bS和pVX2bAS侵染SR1烟草中2b基因的稳定性 | 第70页 |
| ·CMV正义和反义2b基因的相互作用 | 第70-71页 |
| ·pVX2bS和pVX2bAS的进一步应用 | 第71页 |
| 4 小结 | 第71-72页 |
| 第五章 黄瓜花叶病毒正义和反义2b基因转化烟草与番茄及其抗CMV功能分析 | 第72-91页 |
| 1 材料与方法 | 第72-76页 |
| ·CMV全长2b基因植物表达载体的构建 | 第72-73页 |
| ·目标片段(全长2b基因)和目标载体(pBI121)制备 | 第72-73页 |
| ·重组克隆的获得与鉴定 | 第73页 |
| ·全长2b基因植物表达载体的获得 | 第73页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第73-74页 |
| ·农杆菌培养 | 第73页 |
| ·侵染和共培养 | 第73-74页 |
| ·选择分化培养和生根培养 | 第74页 |
| ·移栽 | 第74页 |
| ·CMV正义和反义全长2b基因导入番茄 | 第74页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第74-75页 |
| ·转CMV 2b基因烟草植株的PCR检测 | 第74-75页 |
| ·转CMV 2b基因番茄植株的PCR检测 | 第75页 |
| ·转基因烟草植株的PCR-Southern、斑点杂交和Southern杂交检测 | 第75页 |
| ·转基因烟草植株的RT-PCR检测 | 第75页 |
| ·烟草转基因植株CMV抗性的初步鉴定 | 第75-76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-87页 |
| ·获得CMV正义和反义2b基因植物表达载体pZM6.1和pZM6.2 | 第76-79页 |
| ·获得CMV正义和反义2b基因烟草基因株 | 第79-80页 |
| ·获得CMV正义和反义2b基因番茄基因株 | 第80-81页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第81-85页 |
| ·转CMV正义和反义2b基因烟草植株的PCR检测 | 第81-82页 |
| ·转CMV正义和反义2b基因番茄植株的PCR检测 | 第82页 |
| ·转基因烟草植株的PCR-Southern、斑点杂交和Southern杂交检测 | 第82-84页 |
| ·转CMV正义和反义2b基因烟草植株的RT-PCR检测 | 第84-85页 |
| ·转CMV正义和反义2b基因烟草CMV抗性初步分析 | 第85-87页 |
| 3 讨论 | 第87-89页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第87-88页 |
| ·CMV正义2b基因转基因烟草株系对CMV抗性的分析 | 第88-89页 |
| ·进一步的工作 | 第89页 |
| 4 小结 | 第89-91页 |
| 结论 | 第91-92页 |
| 今后的工作 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-104页 |
| 附录 | 第104-112页 |
| 附录1 CMV-BG的2b基因片段(300bp)测序 | 第104-105页 |
| 附录2 CMV-BG的正义全长2b基因在pSfinx表达载体中测序 | 第105-106页 |
| 附录3 CMV-BG的反义全长2b基因在pSfinx表达载体中测序 | 第106-107页 |
| 附录4 利用地高辛试剂盒法进行PCR-Southern、斑点杂交和Southern杂交检测 | 第107-110页 |
| 附录5 在pBI121中的CMV-BG的正义全长2b基因测序 | 第110-111页 |
| 附录6 在pBI121中的CMV-BG的反义全长2b基因测序 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 作者简介 | 第113页 |
