农杆菌介导的苏云金杆菌抗虫基因cryIA(c)导入辣椒的遗传转化研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 一. 前言 | 第10-18页 |
| 1 植物遗传转化的研究进展 | 第10-11页 |
| 2 农杆菌介导的植物基因转化方法 | 第11-12页 |
| 3 Bt转基因抗虫植物研究进展 | 第12-15页 |
| 4 辣椒基因转化研究进展 | 第15-18页 |
| 二. 材料与方法 | 第18-31页 |
| 1 实验材料 | 第18-22页 |
| ·植物材料 | 第18页 |
| ·菌种、质粒 | 第18页 |
| ·常用贮存液 | 第18-19页 |
| ·化学试剂 | 第19页 |
| ·主要试剂配方 | 第19-20页 |
| ·工具酶及其它分子试剂 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| 2 实验器材 | 第22-23页 |
| 3 实验方法 | 第23-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第23页 |
| ·质粒DNA的碱解法小量制备 | 第23-24页 |
| ·DNA的定量 | 第24页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备、转化 | 第24页 |
| ·DNA限制性内切酶消化 | 第24页 |
| ·辣椒的组织培养 | 第24-25页 |
| ·植物遗传转化方法 | 第25-26页 |
| ·鉴定方法 | 第26-31页 |
| 三. 实验结果 | 第31-44页 |
| 1 pKUC质粒转化根癌农杆菌 | 第31页 |
| 2 Km对外植体筛选浓度确定 | 第31-32页 |
| 3 植株再生体系的建立 | 第32-34页 |
| ·幼苗苗龄对外植体再生能力的影响 | 第32页 |
| ·不同芽诱导培养基对外植体分化能力的诱导作用 | 第32-33页 |
| ·GA_3对不定芽伸长分化的影响 | 第33页 |
| ·不同生根培养基对不定根的诱导 | 第33-34页 |
| 4 影响农杆菌介导辣椒基因转化的因素 | 第34-38页 |
| ·农杆菌菌株类型以及辣椒基因型对转化效率的影响 | 第34-35页 |
| ·vir基因活化培养基对转化效率的影响 | 第35页 |
| ·侵染时间对转化效率的影响 | 第35-36页 |
| ·外植体类型与发育阶段对转化的影响 | 第36-37页 |
| ·预培养时间对转化效率的影响 | 第37-38页 |
| 5 GUS活性检测 | 第38-39页 |
| 6 PCR检测的结果 | 第39页 |
| 7 Southern点杂交检测结果 | 第39-40页 |
| 8 PCR特异扩增片段DNA测序鉴定结果 | 第40-44页 |
| 四. 讨论 | 第44-49页 |
| 1 辣椒植株再生体系的建立 | 第44-45页 |
| 2 影响农杆菌介导辣椒基因转化的因素 | 第45-46页 |
| 3 植物基因工程的潜在问题及解决途径 | 第46-48页 |
| 4 有关下一步实验的计划 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 本文缩写词 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-59页 |
