| 课题1：L1顺序可能与Yunnanese(Aγδβ)°-地贫缺失的发生及Gγ-珠蛋白基因的活化有关 | 第1-47页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| 1.前言 | 第11-13页 |
| 2.材料与方法 | 第13-24页 |
| ·材料 | 第13页 |
| ·YUNNANESE(~Aγδβ)°-地贫杂合子及正常人基因组DNAλ噬菌体文库的构建 | 第13-14页 |
| ·基因组DNA EMBL3λ噬菌体文库的连接与包装 | 第13-14页 |
| ·KW251嗜菌体感受态细胞的制备及EMBL3文库滴度测定 | 第14页 |
| ·探针与杂交 | 第14-18页 |
| ·探针 | 第14-15页 |
| ·随机引物法标记探针DNA(RANDOM PRIMER LABELING) | 第15-16页 |
| ·Southern印迹转移硝酸纤维素膜(NC membrane) | 第16页 |
| ·NC膜的噬斑影印(imprinting)转移 | 第16-17页 |
| ·杂交反应 | 第17-18页 |
| ·筛选EMBL3λ嗜菌体克隆 | 第18-21页 |
| ·噬斑原位杂交筛选： | 第18-19页 |
| ·DNA小量制备及限制酶消化分析 | 第19页 |
| ·平板裂解物制备克隆λ噬菌体原种 | 第19-20页 |
| ·低复数感染法大量制备λDNA | 第20-21页 |
| ·EMBL3λ噬菌体克隆的限制性内切酶作图 | 第21页 |
| ·YUNNANESE(~Aγδβ)°-地贫缺失断点区顺序测定 | 第21-23页 |
| ·模板DNA的准备 | 第21页 |
| ·测序反应 | 第21-22页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第22-23页 |
| ·YUNNANESE(~Aγδβ)°-地贫缺失断点区域序列分析 | 第23-24页 |
| 3.结果 | 第24-36页 |
| ·筛选YUNNANESE(Aγδβ)°-地贫缺失19KB BGLⅡ桥片段克隆 | 第24-25页 |
| ·YUNNANESE(Aγδβ)°-地贫缺失3'断点下游并入区限制性内切酶作图 | 第25页 |
| ·筛选围绕YUNNANESE(~Aγδβ)°-地贫3'缺失断点的11.5KB BGLⅡ正常基因组DNA | 第25-26页 |
| ·3'缺失断点立即下游区核苷酸序列测定 | 第26-29页 |
| ·缺失断点区重叠片段的亚克隆 | 第26-29页 |
| ·断点区核苷酸序列测定 | 第29页 |
| ·YUNNANESE(~Aγδβ)°-地贫缺失断点区的顺序分析 | 第29-31页 |
| ·缺失断点的确定 | 第29页 |
| ·断点旁侧顺序的特征分析 | 第29-31页 |
| ·3'缺失断点处的L1重复顺序 | 第31-36页 |
| ·3'并入顺序的同源性分析 | 第31-33页 |
| ·3'并入L1 DNA转录蛋白结合基序的搜寻 | 第33-36页 |
| 4.讨论 | 第36-43页 |
| ·L1顺序与β-地贫及HPFH缺失3'断点的发生 | 第36-37页 |
| ·5'断点旁侧DNA顺序中的重组结构特征 | 第37-39页 |
| ·3'L1顺序介导β-珠蛋白基因簇缺失的可能方式 | 第39-41页 |
| ·缺失导致L1顺序的并入可能与胎儿Gγ-基因的活化相关 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 课题2：异丁酰胺诱导人及小鼠珠蛋白基因表达的研究 | 第47-90页 |
| 摘要 | 第48-53页 |
| 1.研究背景 | 第53-56页 |
| 2.材料与方法 | 第56-66页 |
| ·丁酸衍生物 | 第56页 |
| ·异丁酰胺(Isobutyramide) | 第56页 |
| ·丁酸钠盐(Sodium Butyrate,NaB) | 第56页 |
| ·重组粘粒μLCRAγψβδβ及其MEL GM979细胞的稳定转化子库 | 第56-58页 |
| ·鼠红白血病(mouse erythroleukemia,MEL)细胞系GM979 | 第57-58页 |
| ·MEL GM979细胞的μLCRAγψβδβ稳定转化子库 | 第58页 |
| ·实验动物 | 第58-59页 |
| ·小鼠 | 第58页 |
| ·家兔 | 第58页 |
| ·血液学毒性分析 | 第58页 |
| ·电解质毒性测定 | 第58-59页 |
| ·珠蛋白基因的RNA酶保护分析 | 第59-66页 |
| ·培养细胞及全血细胞总RNA的一步提取法 | 第59页 |
| ·体外转录标记合成单链RNA探针 | 第59-62页 |
| ·pGEM-4z／Mspl markers end-Labeling | 第62页 |
| ·RNase保护分析实验 | 第62-66页 |
| 3.实验结果 | 第66-79页 |
| ·异丁酰胺诱导珠蛋白基因在MEL GM979细胞中表达 | 第66-72页 |
| ·异丁酰胺对转染的人Aγ-基因表达的显著诱导及其作用的剂量相关性 | 第66页 |
| ·异丁酰胺对于转染的人β-珠蛋白基因的诱导 | 第66-69页 |
| ·异丁酰胺对于内源鼠α-珠蛋白基因(Mα)的诱导 | 第69页 |
| ·异丁酰胺对Aγ-基因的选择性诱导 | 第69-72页 |
| ·异丁酰胺诱导正常成熟小鼠体内(IN VIVO)胚胎珠蛋白基因的表达 | 第72-75页 |
| ·异丁酰胺对实验动物的毒性作用分析 | 第75-79页 |
| ·血液学毒性 | 第75-77页 |
| ·电解质毒性 | 第77-79页 |
| 4.讨论 | 第79-85页 |
| ·异丁酰胺是一种有效的γ—珠蛋白基因表达的诱导剂 | 第79页 |
| ·异丁酰胺的诱导选择性及其可能的机制 | 第79-82页 |
| ·体内诱导胚胎εγ-珠蛋白基因表达与成体红系细胞早期分化。 | 第82-84页 |
| ·染色质结构的作用。 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-90页 |
| 工作小结 | 第90-92页 |
| 综述：药物激活胎儿γ-珠蛋白基因及其在临床治疗β-地中海贫血中的应用进展 | 第92-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
