| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-34页 |
| 1 柿树炭疽菌及其侵染策略 | 第12-17页 |
| ·柿树炭疽病及其病原菌 | 第12-13页 |
| ·炭疽菌侵染策略 | 第13-14页 |
| ·胶孢炭疽菌侵染策略 | 第14-15页 |
| ·炭疽菌致病相关基因的研究 | 第15-17页 |
| 2 炭疽菌基因组文库研究 | 第17-22页 |
| ·基因组文库研究进展及应用 | 第17-19页 |
| ·Cosmid载体 | 第19-20页 |
| ·炭疽菌基因组文库 | 第20-22页 |
| 3 农杆菌介导的T-DNA转化及插入突变 | 第22-28页 |
| ·丝状真菌遗传转化的研究进展 | 第22-23页 |
| ·农杆菌介导的T-DNA转化 | 第23-27页 |
| ·T-DNA插入突变的可行性分析 | 第27-28页 |
| 4 侧翼序列克隆技术研究 | 第28-33页 |
| ·反向PCR(Inverse PCR,IPCR) | 第29-30页 |
| ·热不对称交错PCR(Thermal Asmmetric Interlaced PCR) | 第30-31页 |
| ·外源接头PCR | 第31-33页 |
| 5 研究背景及研究内容 | 第33-34页 |
| 第二章 柿树炭疽菌粘粒基因组文库的构建及鉴定 | 第34-60页 |
| 引言 | 第34-35页 |
| 1 材料与方法 | 第35-45页 |
| ·试验材料 | 第35-37页 |
| ·试验方法 | 第37-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-56页 |
| ·高分子量基因组DNA的制备 | 第45-48页 |
| ·插入片断的制备 | 第48-49页 |
| ·SuperCos1粘粒载体的制备 | 第49-51页 |
| ·连接、包装及转染 | 第51页 |
| ·包装反应物的滴度测定 | 第51-52页 |
| ·文库的扩增与保存 | 第52-53页 |
| ·扩增后粘粒基因组文库滴度测定 | 第53-54页 |
| ·文库质量鉴定 | 第54-56页 |
| 3 小结与讨论 | 第56-60页 |
| ·SuperCos1粘粒载体的优点 | 第56-57页 |
| ·提取柿树炭疽菌基因组DNA的方法优化 | 第57页 |
| ·柿树炭疽菌基因组DNA的部分消化 | 第57-58页 |
| ·库质量鉴定 | 第58页 |
| ·文库的保存 | 第58-60页 |
| 第三章 柿树炭疽菌的农杆菌介导转化、鉴定及突变体初步筛选 | 第60-74页 |
| 引言 | 第60-61页 |
| 1 材料与方法 | 第61-67页 |
| ·试验材料 | 第61-63页 |
| ·试验方法 | 第63-67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-72页 |
| ·农杆菌AGL-1电转化产物的PCR鉴定 | 第67页 |
| ·柿树炭疽菌的T-DNA转化 | 第67-68页 |
| ·柿树炭疽菌转化子检测 | 第68-70页 |
| ·转化子生物学特性变异分析 | 第70-71页 |
| ·转化子致病性测定及致病性相关突变体筛选 | 第71-72页 |
| 3 小结与讨论 | 第72-74页 |
| ·柿树炭疽菌共培养时间的比较 | 第72-73页 |
| ·双元载体的分析 | 第73页 |
| ·乙酰丁香酮(AS)对转化的影响 | 第73页 |
| ·转化条件的优化及结果 | 第73-74页 |
| 第四章 柿树炭疽菌无致病性突变体生物学特性及SOUTHERN杂交分析 | 第74-90页 |
| 引言 | 第74-75页 |
| 1 材料与方法 | 第75-80页 |
| ·试验材料 | 第75-77页 |
| ·试验方法 | 第77-80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-88页 |
| ·柿树炭疽菌无致病性突变体生物学特性分析 | 第80-85页 |
| ·致病性测定 | 第85页 |
| ·无致病性突变体Southern杂交分析 | 第85-88页 |
| 3 小结与讨论 | 第88-90页 |
| ·柿树炭疽菌无致病性突变体生物学特性及致病性分析 | 第88页 |
| ·柿树炭疽菌无致病性突变体Southern杂交分析 | 第88页 |
| ·转化子拷贝数影响因素分析 | 第88-90页 |
| 第五章 柿树炭疽菌无致病性突变体侧翼序列扩增及分析 | 第90-126页 |
| 引言 | 第90-91页 |
| 1 材料与方法 | 第91-100页 |
| ·试验材料 | 第91-93页 |
| ·试验方法 | 第93-100页 |
| 2 结果与分析 | 第100-123页 |
| ·柿树炭疽菌无致病性突变体Cg-10的侧翼序列扩增及序列分析 | 第100-108页 |
| ·柿树炭疽菌无致病性突变体Cg-32的侧翼序列扩增及序列分析 | 第108-117页 |
| ·柿树炭疽菌无致病性突变体Cg-613的侧翼序列扩增及序列分析 | 第117-123页 |
| 3 小结与讨论 | 第123-126页 |
| ·侧翼序列扩增方法比较 | 第123-124页 |
| ·T-DNA插入特点分析 | 第124-125页 |
| ·突变体功能预测分析 | 第125-126页 |
| 全文小结 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-141页 |
| 附录 | 第141页 |
