| 致谢 | 第1-13页 |
| 中文摘要 | 第13-15页 |
| ABSTRACT | 第15-18页 |
| 缩略语(Abbreviation) | 第18-19页 |
| 第1章 文献综述 | 第19-39页 |
| 1 信息化合物 | 第19-20页 |
| ·昆虫性信息素的性质与作用 | 第19-20页 |
| ·植物挥发性化合物的性质与作用 | 第20页 |
| 2 昆虫的化学感受器 | 第20-21页 |
| 3.昆虫嗅觉相关蛋白的研究进展 | 第21-35页 |
| ·气味物质的分子结构 | 第23-24页 |
| ·气味结合蛋白的分子结构 | 第24-26页 |
| ·气味结合蛋白在触角中的分布 | 第26-27页 |
| ·气味结合蛋白的生化特性 | 第27-28页 |
| ·气味结合蛋白的表达时间及其代谢 | 第28页 |
| ·气味结合蛋白的配体结合实验 | 第28-30页 |
| ·气味结合蛋白的生理功能 | 第30-31页 |
| ·气味结合蛋白的研究方法 | 第31-32页 |
| ·昆虫嗅觉受体的蛋白结构 | 第32-33页 |
| ·昆虫嗅觉受体的功能 | 第33-35页 |
| 4 水稻鳞翅目害虫的重要性及其控制新途径思考 | 第35-38页 |
| 5 本研究的背景 | 第38页 |
| 6 本研究的目的与意义 | 第38-39页 |
| 第2章 二化螟普通气味结合蛋白2基因克隆、表达及功能分析 | 第39-65页 |
| 引言 | 第39-40页 |
| 1.材料与方法 | 第40-49页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40-42页 |
| ·二化螟触角gobp2基因的克隆及序列分析 | 第42-44页 |
| ·昆虫触角总RNA的提取 | 第42页 |
| ·甲醛变性电泳的检测 | 第42页 |
| ·提取的总RNA浓度及纯度的测定 | 第42页 |
| ·PCR引物的设计及合成 | 第42-43页 |
| ·cDNA第一链、第二链合成 | 第43页 |
| ·二化螟gobp2基因片段的RACE扩增 | 第43页 |
| ·PCR产物的纯化及克隆 | 第43页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl2法) | 第43页 |
| ·连接载体的转化 | 第43-44页 |
| ·二化螟gobp2基因全长的扩增 | 第44页 |
| ·二化螟gobp2基因序列特征分析 | 第44页 |
| ·二化螟触角gobp2基因的表达 | 第44-46页 |
| ·二化螟gobp2基因原核表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白的表达 | 第45页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第45页 |
| ·Western Blot | 第45-46页 |
| ·二化螟触角gobp2基因表达蛋白的纯化及特性分析 | 第46-48页 |
| ·菌液的培养及菌体的处理 | 第46页 |
| ·镍螯合琼脂糖凝胶色谱分离His标签重组蛋白包涵体 | 第46-47页 |
| ·以纯化的目的蛋白为抗原制备多克隆抗体 | 第47-48页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第48页 |
| ·二化螟触角gobp2基因表达蛋白的特性分析 | 第48-49页 |
| ·半定量RT-PCR | 第48页 |
| ·二化螟不同组织SDS-PAGE电泳及Western Blot分析 | 第48页 |
| ·荧光测定 | 第48-49页 |
| ·数据分析 | 第49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-63页 |
| ·二化螟触角总RNA的提取 | 第49-50页 |
| ·二化螟gobp2基因5'RACE扩增扩增及序列测定 | 第50-54页 |
| ·二化螟触角gobp2基因全长序列的扩增及序列分析 | 第54-55页 |
| ·二化螟触角gobp2基因原核表达载体的构建 | 第55页 |
| ·融合蛋白的表达、纯化、多克隆抗体的制备 | 第55-58页 |
| ·二化螟GOBP2基因在昆虫组织中的表达谱 | 第58-59页 |
| ·gobp2基因半定量RT-PCR | 第58页 |
| ·GOBP2蛋白在不同组织中的SDS-PAGE及Western blot分析 | 第58-59页 |
| ·二化螟触角普通气味结合蛋白的荧光特征检测 | 第59-63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| 第3章 二化螟普通气味结合蛋白2基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的表达与鉴定 | 第65-70页 |
| 引言 | 第65页 |
| 1.材料与方法 | 第65-67页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·试剂 | 第65-66页 |
| ·方法 | 第66-67页 |
| ·重组杆状病毒转移质粒pBacHT/CsupGOBP2的构建 | 第66页 |
| ·重组Bacmid的获得 | 第66页 |
| ·昆虫细胞的培养、转染及重组病毒的感染 | 第66页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第66页 |
| ·Western blot分析 | 第66-67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-69页 |
| ·重组杆状病毒转移载体的构建 | 第67页 |
| ·重组病毒Bacmid的获得及重组Bacmid的转染、鉴定 | 第67-68页 |
| ·SDS-PAGE及Western Blot分析 | 第68-69页 |
| 3.讨论 | 第69-70页 |
| 第4章 大螟和稻纵卷叶螟触角普通气味结合蛋白2基因部分序列的克隆及序列分析 | 第70-79页 |
| 引言 | 第70页 |
| 1.材料与方法 | 第70-73页 |
| ·实验材料与试剂 | 第70-71页 |
| ·方法 | 第71-73页 |
| ·昆虫触角总RNA的提取 | 第71页 |
| ·提取的总RNA浓度及纯度的测定 | 第71页 |
| ·PCR引物的设计及合成 | 第71页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第71-72页 |
| ·PCR扩增 | 第72页 |
| ·PCR产物的纯化及克隆 | 第72页 |
| ·大螟、稻纵卷叶螟GOBP2基因序列分析 | 第72-73页 |
| 2 结果与分析 | 第73-78页 |
| ·大螟、稻纵卷叶螟GOBP2基因的扩增和克隆 | 第73页 |
| ·序列测定和分析 | 第73-78页 |
| 3.讨论 | 第78-79页 |
| 第5章 二化螟触角普通气味结合蛋白1基因的克隆、序列分析、表达及功能分析 | 第79-89页 |
| 引言 | 第79页 |
| 1.材料与方法 | 第79-82页 |
| ·实验材料与试剂 | 第79-80页 |
| ·实验材料 | 第79页 |
| ·主要试剂 | 第79-80页 |
| ·菌株及质粒载体 | 第80页 |
| ·气味分子 | 第80页 |
| ·方法 | 第80-82页 |
| ·PCR引物的设计及合成 | 第80页 |
| ·二化螟gobp1基因片段的RACE扩增 | 第80-81页 |
| ·PCR产物的纯化及克隆 | 第81页 |
| ·二化螟gobp1基因全长的扩增 | 第81页 |
| ·二化螟gobp1基因的序列分析 | 第81页 |
| ·二化螟gobp1基因原核表达载体的构建 | 第81页 |
| ·融合蛋白的表达及SDS-PAGE电泳分析 | 第81-82页 |
| ·兔多克隆抗体的制备 | 第82页 |
| ·诱导表达蛋白的纯化 | 第82页 |
| ·荧光测定 | 第82页 |
| 2.结果与分析 | 第82-88页 |
| ·cDNA序列分析 | 第82-83页 |
| ·二化螟触角gobp1基因原核表达载体的构建 | 第83-87页 |
| ·二化螟触角gobp1基因的诱导表达、抗体制备及蛋白纯化 | 第87-88页 |
| 3.讨论 | 第88-89页 |
| 第6章 二化螟信息素结合蛋白pbp2基因的克隆、序列分析、表达及功能分析 | 第89-108页 |
| 引言 | 第89页 |
| 1.材料与方法 | 第89-93页 |
| ·-实验材料与试剂 | 第89页 |
| ·昆虫触角总RNA的提取、检测、浓度测定 | 第89页 |
| ·昆虫基因组DNA的提取 | 第89-90页 |
| ·PCR引物的设计及合成 | 第90页 |
| ·PBP部分片段的扩增 | 第90页 |
| ·二化螟PBP基因片段的RACE扩增 | 第90-91页 |
| ·PCR产物的纯化、克隆 | 第91页 |
| ·二化螟pbp2基因的基因组DNA扩增 | 第91页 |
| ·二化螟pbp2基因的序列分析 | 第91页 |
| ·二化螟pbp2基因原核表达载体的构建 | 第91-92页 |
| ·融合蛋白的表达及SDS-PAGE电泳分析 | 第92页 |
| ·兔多克隆抗体的制备 | 第92页 |
| ·诱导表达蛋白的纯化 | 第92页 |
| ·荧光测定 | 第92-93页 |
| ·荧光测定: | 第92-93页 |
| ·直接测定法 | 第93页 |
| ·数据分析: | 第93页 |
| 2.结果与分析 | 第93-105页 |
| ·pbp2基因cDNA部分序列的扩增 | 第93页 |
| ·pbp2基因的5'RACE、3'RACE扩增 | 第93-95页 |
| ·pbp2基因cDNA序列的拼接及全长基因的扩增 | 第95-96页 |
| ·二化螟pbp2基因的基因组DNA扩增及分析 | 第96-101页 |
| ·二化螟pbp2基因原核表达载体的构建 | 第101-102页 |
| ·二化螟PBP2融合蛋白的表达及SDS-PAGE分析及多克隆抗体的制备 | 第102页 |
| ·诱导蛋白的纯化 | 第102-103页 |
| ·荧光检测实验 | 第103-105页 |
| 3.讨论 | 第105-108页 |
| 第7章 二化螟和大螟嗅觉受体基因的克隆及序列分析 | 第108-115页 |
| 引言 | 第108-109页 |
| 1.材料与方法 | 第109-111页 |
| ·实验材料与试剂 | 第109页 |
| ·方法 | 第109-111页 |
| ·昆虫触角总RNA的提取 | 第109页 |
| ·提取的总RNA浓度及纯度的测定 | 第109页 |
| ·PCR引物的设计及合成 | 第109-110页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第110页 |
| ·PCR扩增 | 第110页 |
| ·PCR产物的纯化及克隆 | 第110页 |
| ·二化螟、大螟OR基因序列分析 | 第110-111页 |
| 2 结果与分析 | 第111-113页 |
| ·二化螟、大螟OR基因的扩增和克隆 | 第111页 |
| ·序列测定和分析 | 第111-113页 |
| 3.讨论 | 第113-115页 |
| 第8章 二化螟触角cDNA文库的构建、检测及相关基因筛选 | 第115-123页 |
| 引言 | 第115页 |
| 1.材料与方法 | 第115-120页 |
| ·实验材料 | 第115-116页 |
| ·供试虫源 | 第115页 |
| ·主要试剂 | 第115-116页 |
| ·实验方法 | 第116-120页 |
| ·二化螟触角RNA的提取及质量检测 | 第116页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第116页 |
| ·cDNA的长距离PCR(LD-PCR)扩增 | 第116-117页 |
| ·LD-PCR产物的蛋白酶K消化 | 第117页 |
| ·cDNA的SfiI的酶切反应 | 第117-118页 |
| ·cDNA片段的分级分离 | 第118页 |
| ·cDNA与pDNR-LIB线性载体的连接 | 第118-119页 |
| ·重组质粒的电转化 | 第119页 |
| ·文库滴度测定、扩增及保存 | 第119页 |
| ·文库重组率及插入片段长度的检测 | 第119-120页 |
| ·相关基因的筛选 | 第120页 |
| 2.结果与分析 | 第120-121页 |
| ·二化螟触角RNA的提取 | 第120-121页 |
| ·cDNA文库构建质量的检测 | 第121页 |
| 3.讨论 | 第121-123页 |
| 第9章 结论和总讨论 | 第123-126页 |
| 参考文献 | 第126-137页 |
| 附录A 实验主要仪器和设备 | 第137-138页 |
| 作者简历 | 第138页 |
