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近平滑假丝酵母立体选择性羰基还原酶催化特性的定点突变分子改造及其评价

摘要第1-5页
Abstract第5-7页
目录第7-9页
第一章 绪论第9-20页
   ·分子手性的重要性第9-10页
   ·氧化还原酶及其催化不对称反应第10-15页
     ·氧化还原酶概述第10-12页
     ·短链脱氢/还原酶第12-15页
   ·酶蛋白的分子改造第15-18页
     ·酶的蛋白质工程第15-17页
     ·酶的定点突变理性设计第17-18页
   ·本课题研究的内容第18-20页
     ·立题意义第18页
     ·研究具体内容第18-20页
第二章 材料与方法第20-29页
   ·实验材料第20-22页
     ·菌种第20页
     ·培养基第20页
     ·实验试剂第20-21页
     ·实验仪器第21-22页
   ·实验方法第22-29页
     ·突变株的构建第22-24页
       ·突变基因的克隆第22-24页
       ·突变株的构建第24页
     ·突变酶的活性表达与纯化第24-26页
       ·突变酶的活性表达第24页
       ·突变酶的纯化第24-25页
       ·突变酶的定性检测第25页
       ·突变酶的定量检测第25-26页
     ·野生型SCR1 酶赖氨酸的还原性甲基化第26页
     ·突变酶酶活的测定第26-27页
       ·突变酶对2-羟基苯乙酮和COBE 催化活性的检测第26页
       ·突变酶的底物特异性的检测第26-27页
     ·突变株的立体选择性的检测第27-29页
       ·突变株的全细胞催化转化2-羟基苯乙酮和COBE第27页
       ·突变株的全细胞催化转化其他潜手性底物第27页
       ·手性产物的检测方法第27-29页
第三章 结果与讨论第29-47页
   ·羰基还原酶辅酶结合域的空间结构分析及其定点突变第29-34页
     ·野生型SCR1 酶辅酶结合域空间结构分析第29页
     ·野生型SCR1 酶和辅酶结合域突变酶的活性表达与纯化第29-31页
     ·辅酶结合域位点突变对酶催化性能的影响第31-34页
       ·定点突变对催化活性的影响第31-32页
       ·定点突变对酶的底物特异性的影响第32-33页
       ·定点突变对立体选择性的影响第33-34页
   ·底物结合域定点饱和突变库的构建及其性能评价第34-47页
     ·野生型SCR1 酶的甲基化及其核磁共振图谱的检测第34-36页
     ·野生型SCR1 酶和辅酶结合域突变酶的活性表达与纯化第36-38页
     ·底物结合域K138 位点突变对酶催化性能的影响第38-44页
       ·K138 饱和突变库对催化活性的影响第38-40页
       ·K138 突变为极性碱性氨基酸时对底物特异性的影响第40-41页
       ·K138 突变为极性酸性氨基酸时对底物特异性的影响第41-42页
       ·K138 突变为极性中性氨基酸时对底物特异性的影响第42-43页
       ·K138 突变为非极性氨基酸时对底物特异性的影响第43-44页
     ·定点饱和突变对立体选择性的影响第44-47页
       ·K138 饱和突变库立体选择性的考察第44-45页
       ·K138H/R 不对称催化还原芳香酮第45-47页
主要结论第47-49页
致谢第49-50页
参考文献第50-54页
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第54页

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