| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-30页 |
| ·几丁质 | 第10-15页 |
| ·几丁质的结构 | 第10页 |
| ·几丁质的分布 | 第10-11页 |
| ·几丁质及其衍生物的应用 | 第11-13页 |
| ·化学法水解几丁质 | 第13-14页 |
| ·酶法水解几丁质 | 第14-15页 |
| ·几丁质降解系统作为农药靶标 | 第15页 |
| ·昆虫几丁质酶 | 第15-22页 |
| ·18家族几丁质酶 | 第15-16页 |
| ·昆虫几丁质酶的分类 | 第16-18页 |
| ·昆虫几丁质酶的生理功能 | 第18-19页 |
| ·昆虫几丁质酶的晶体结构 | 第19-21页 |
| ·昆虫几丁质酶的应用 | 第21-22页 |
| ·20家族β-N-乙酰己糖胺酶 | 第22-28页 |
| ·20家族β-N-乙酰己糖胺酶 | 第22页 |
| ·20家族β-N-乙酰己糖胺酶的生理功能 | 第22-23页 |
| ·20家族β-N-乙酰己糖胺酶的晶体结构 | 第23-26页 |
| ·20家族β-N-乙酰己糖胺酶的应用 | 第26-28页 |
| ·本论文的选题依据和研究内容 | 第28-30页 |
| ·选题依据 | 第28页 |
| ·研究内容 | 第28-30页 |
| 2 亚洲玉米螟几丁质酶5基因的调取及转录水平研究 | 第30-39页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·实验材料与方法 | 第30-33页 |
| ·总RNA提取及cDNA合成 | 第30-31页 |
| ·PCR反应获取同源序列 | 第31页 |
| ·5’RACE获取5’端序列 | 第31页 |
| ·3’RACE获取3’端序列 | 第31-32页 |
| ·序列分析 | 第32-33页 |
| ·亚洲玉米螟OfCHT5基因转录水平分析 | 第33页 |
| ·实验结果 | 第33-37页 |
| ·亚洲玉米螟几丁质酶5基因OfCHT5 | 第33页 |
| ·OfCHT5编码蛋白质的性质预测 | 第33页 |
| ·OfCHT5编码氨基酸序列保守氨基酸残基的分析 | 第33-35页 |
| ·OfCHT5的进化分析 | 第35-37页 |
| ·OfCHT5在亚洲玉米螟不同生长发育时期的转录水平 | 第37页 |
| ·分析讨论 | 第37-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 3 亚洲玉米螟几丁质酶5的重组表达及性质表征 | 第39-55页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·实验材料与方法 | 第39-43页 |
| ·pPIC9-OfCht5表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·pPIC9-OfCht5表达载体转化毕赤酵母GS115 | 第40页 |
| ·重组菌株的诱导表达 | 第40页 |
| ·蛋白定性、定量方法与酶活测定方法 | 第40-41页 |
| ·重组OfCht5的分离纯化 | 第41-42页 |
| ·重组OfCht5的糖基化 | 第42页 |
| ·温度和pH值对重组OfCht5活力的影响 | 第42页 |
| ·重组OfCht5水解高聚底物 | 第42页 |
| ·重组OfCht5对寡聚底物的催化动力学 | 第42-43页 |
| ·重组OfCht5与OfHex1协同作用水解几丁质 | 第43页 |
| ·实验结果 | 第43-52页 |
| ·OfCht5在毕赤酵母表达载体中的克隆 | 第43-44页 |
| ·OfCht5在毕赤酵母中的表达 | 第44-45页 |
| ·重组OfCht5的纯化策略 | 第45-46页 |
| ·重组OfCht5的糖基化 | 第46-47页 |
| ·重组OfCht5催化的最适条件 | 第47页 |
| ·重组OfCht5对高聚底物的水解 | 第47-48页 |
| ·重组OfCht5的外切酶活性 | 第48-50页 |
| ·重组OfCht5对寡聚底物的催化动力学 | 第50页 |
| ·重组OfCht5与OfHex1协同作用水解几丁质 | 第50-52页 |
| ·分析讨论 | 第52-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 4 亚洲玉米螟OfHex1中Trp~(4 90)氨基酸残基与底物抑制 | 第55-68页 |
| ·引言 | 第55页 |
| ·实验材料与方法 | 第55-59页 |
| ·糖苷水解酶20家族β-N-乙酰己糖胺酶的生物信息学分析 | 第55页 |
| ·OfHex1-W490A突变体的构建、表达及分离纯化 | 第55-56页 |
| ·粘质沙雷菌壳二糖酶SmChb的克隆表达及分离纯化 | 第56-58页 |
| ·酶活测定方法 | 第58页 |
| ·动力学常数的测定方法 | 第58-59页 |
| ·pH和温度稳定性的测定方法 | 第59页 |
| ·实验结果与讨论 | 第59-67页 |
| ·糖苷水解酶20家族β-N-乙酰己糖胺酶催化活性口袋分析 | 第59-62页 |
| ·OfHex1中Trp~(490)残基对于底物抑制的关键作用 | 第62-65页 |
| ·OfHex1-W490A突变体对于寡糖水解功能的评估 | 第65-66页 |
| ·重组OfHex1,OfHex1-W490A和SmChb的温度和pH稳定性 | 第66-67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 附录A OfCHT5的cDNA序列与编码的氨基酸序列 | 第76-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
