| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-32页 |
| ·鸡传染性支气管炎概况 | 第16-23页 |
| ·宿主对IBV易感性的差异 | 第16页 |
| ·流行病学及临床症状 | 第16-17页 |
| ·鸡传染性支气管炎病理变化 | 第17页 |
| ·IBV引起免疫反应的实质 | 第17-18页 |
| ·IB的诊断 | 第18页 |
| ·鸡传染性支气管炎病毒的研究概况 | 第18-20页 |
| ·鸡传染性支气管炎病毒主要结构蛋白及其生物学功能 | 第20-23页 |
| ·鸡传染性支气管炎病毒核蛋白及其表位研究进展 | 第23-27页 |
| ·N蛋白研究进展 | 第23-26页 |
| ·IBV N蛋白表位研究进展 | 第26-27页 |
| ·单链抗体研究进展 | 第27-32页 |
| ·抗体的分子结构 | 第27-28页 |
| ·单链抗体的结构 | 第28页 |
| ·单链抗体的特点 | 第28-29页 |
| ·单链抗体的改进类型 | 第29页 |
| ·单链抗体基因的构建 | 第29-30页 |
| ·单链抗体的表达 | 第30页 |
| ·单链抗体的应用前景 | 第30-31页 |
| ·单链抗体技术的发展趋势及需要解决的问题 | 第31页 |
| ·冠状病毒单链抗体研究进展 | 第31-32页 |
| 第二章 抗鸡传染性支气管炎病毒核蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 | 第32-55页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·实验动物 | 第33页 |
| ·毒株、细胞、菌株和质粒 | 第33页 |
| ·引物 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33-34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-45页 |
| ·抗原的制备 | 第34-35页 |
| ·动物免疫 | 第35页 |
| ·N基因的克隆与表达 | 第35-40页 |
| ·表达产物的western blotting分析 | 第40页 |
| ·细胞融合 | 第40-44页 |
| ·杂交瘤细胞及单克隆抗体特性的鉴定 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-52页 |
| ·抗原的纯化和免疫 | 第45页 |
| ·IBV N基因的PCR扩增 | 第45-46页 |
| ·N基因与pMD-18T载体相连的重组质粒鉴定结果 | 第46-47页 |
| ·N基因与pGEX-6p-1载体相连的重组质粒鉴定结果 | 第47-48页 |
| ·融合蛋白的SDS-PAGE及western blotting分析 | 第48-49页 |
| ·ELISA筛选方法的建立 | 第49页 |
| ·阳性杂交瘤细胞筛选结果 | 第49页 |
| ·单抗亚型的鉴定 | 第49-50页 |
| ·杂交瘤细胞的染色体计数 | 第50页 |
| ·4株单抗与重组N蛋白的western blotting分析 | 第50-51页 |
| ·4株单抗与鸡传染性支气管炎病毒tl/CH/LDT3/03核蛋白的western blotting分析 | 第51-52页 |
| ·间接ELISA方法检测单抗上清的结果 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-55页 |
| 第三章 鸡传染性支气管炎病毒核蛋白B细胞线性表位的鉴定 | 第55-72页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·毒株 | 第56页 |
| ·菌株和载体 | 第56页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第56页 |
| ·主要仪器 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57-62页 |
| ·抗IBVN蛋白单克隆抗体抗原表位设计流程 | 第57-58页 |
| ·目的基因的克隆 | 第58-60页 |
| ·目的基因的原核表达 | 第60-61页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第61页 |
| ·表达产物与单克隆抗体6H3、6F9 westem blotting分析 | 第61页 |
| ·融合蛋白的割胶纯化 | 第61页 |
| ·抗IBV N蛋白单克隆抗体6H3、6F9抗原表位的鉴定 | 第61页 |
| ·ELISA鉴定抗原表位 | 第61-62页 |
| ·IBV的不同分离株与mAbs 6H3、6F9的反应性 | 第62页 |
| ·结果 | 第62-70页 |
| ·N1、N、N3、N4、N5基因的PCR扩增结果 | 第62页 |
| ·N1-1、N1-2和N1-3基因的PCR扩增结果 | 第62-63页 |
| ·N基因与的分段克隆、表达 | 第63页 |
| ·mAb 6H3和mAb 6F9与N基因分段表达产物的western blotting分析 | 第63-64页 |
| ·IBV N1基因的分段克隆与表达以及western blotting分析 | 第64-65页 |
| ·N1-2和N1-3与N1和N2互相重叠的部分进行了克隆与表达结果 | 第65页 |
| ·N1-2和N1-3与N1和N2互相重叠的部分以及western blotting分析 | 第65-66页 |
| ·ELISA检测单克隆抗体6H3和6F9与N基因分段表达产物的反应性 | 第66-67页 |
| ·单克隆抗体6H3和6F9与其他传染性支气管炎病毒反应结果 | 第67-68页 |
| ·mAb 6F9和mAb 6H3与不同IBV分离株western blotting分析结果 | 第68-69页 |
| ·mAb 6F9所识别表位的各毒株的氨基酸序列差异分析 | 第69页 |
| ·mAb 6H3所识别表位的各毒株的氨基酸序列差异分析 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 第四章 抗IBV N蛋白单链抗体的制备及其生物学活性的研究 | 第72-88页 |
| ·材料与方法 | 第73-74页 |
| ·载体、菌株、细胞 | 第73页 |
| ·酶类及主要生化试剂 | 第73页 |
| ·引物 | 第73-74页 |
| ·主要仪器设备 | 第74页 |
| ·实验方法 | 第74-80页 |
| ·目的基因的克隆 | 第74-77页 |
| ·目的基因的原核表达 | 第77-79页 |
| ·单链抗体生物学活性的初步研究 | 第79-80页 |
| ·结果 | 第80-85页 |
| ·RT-PCR产物的鉴定结果 | 第80页 |
| ·VH和VL基因序列测定的结果 | 第80-81页 |
| ·重叠延伸PCR扩增单链抗体基因的结果 | 第81页 |
| ·单链抗体基因的序列测定结果: | 第81-82页 |
| ·单链抗体基因重组表达质粒的PCR鉴定结果 | 第82页 |
| ·单链抗体基因重组表达质粒的酶切鉴定结果 | 第82-83页 |
| ·scFv的表达、纯化及SDS-PAGE分析 | 第83-84页 |
| ·双抗体夹心ELISA方法测定scFv的活性 | 第84页 |
| ·scFv与重组鸡传染性支气管炎病毒核蛋白Western blotting分析 | 第84-85页 |
| ·竞争ELISA方法测定scFv的活性 | 第85页 |
| ·讨论 | 第85-88页 |
| 参考文献 | 第88-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 作者简历 | 第99页 |
