| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-28页 |
| ·IBD及IBDV研究概况 | 第14-20页 |
| ·IBDV的形态结构 | 第15页 |
| ·IBDV的基因组 | 第15-16页 |
| ·IBDV的编码蛋白 | 第16-19页 |
| ·IBDV un-translated region | 第19-20页 |
| ·Real-time RT-PCR | 第20-22页 |
| ·目前我国IBD的流行情况 | 第20页 |
| ·诊断方法 | 第20-21页 |
| ·Real-time RT-PCR | 第21-22页 |
| ·Real-time RT-PCR在IBDV检测中的应用 | 第22页 |
| ·Reverse-genetic system | 第22-27页 |
| ·IBDV reverse-genetic system | 第22-24页 |
| ·利用Reverse-genetic system研究IBDV嗜性、毒力及标记疫苗 | 第24-26页 |
| ·利用Reverse-genetic system研究IBDV的复制 | 第26-27页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 鸡传染性法氏囊病病毒Real-time RT-PCR检测方法的建立与应用 | 第28-38页 |
| ·材料与方法 | 第28-32页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·病毒、细胞和质粒 | 第29页 |
| ·引物和探针 | 第29-30页 |
| ·病毒RNA的提取和cDNA合成 | 第30页 |
| ·阳性质粒标准品的制备 | 第30页 |
| ·常规PCR | 第30页 |
| ·Real-time RT-PCR反应条件的建立与优化 | 第30-31页 |
| ·特异性试验 | 第31页 |
| ·敏感性试验 | 第31页 |
| ·重复性试验 | 第31页 |
| ·比较分析IBDV在CEF和DF-1 细胞上的复制特性 | 第31-32页 |
| ·结果 | 第32-36页 |
| ·PCR退火温度的确定 | 第32页 |
| ·Real-time RT-PCR反应条件的确定及标准曲线的建立 | 第32-34页 |
| ·Real-time RT-PCR的特异性 | 第34页 |
| ·Real-time RT-PCR的敏感性 | 第34-35页 |
| ·Real-time RT-PCR的重复性 | 第35页 |
| ·IBDV Gt株在DF-1 细胞上引起的CPE | 第35页 |
| ·IBDV Gt株在CEF和DF-1 细胞上的复制特性 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 鸡传染性法氏囊病病毒VP3蛋白990位氨基酸影响病毒的复制 | 第38-54页 |
| ·材料与方法 | 第39-46页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·病毒、细胞和质粒 | 第39页 |
| ·SPF鸡 | 第39页 |
| ·引物的设计与合成 | 第39-40页 |
| ·双酶切介导的区段替换 | 第40-41页 |
| ·Site-directed mutagenesis介导的氨基酸突变 | 第41-42页 |
| ·嵌合及突变株A节段核酶结构的引入 | 第42-43页 |
| ·嵌合及突变株A节段真核表达载体的构建 | 第43页 |
| ·病毒拯救 | 第43-44页 |
| ·拯救病毒RT-PCR及测序鉴定 | 第44页 |
| ·拯救病毒间接免疫荧光鉴定 | 第44-45页 |
| ·拯救病毒体外复制动力学试验 | 第45页 |
| ·拯救病毒体内复制动力学试验 | 第45页 |
| ·拯救病毒毒力测定 | 第45-46页 |
| ·试验鸡法氏囊RT-PCR与序列测定 | 第46页 |
| ·VP3 C端氨基酸的比对 | 第46页 |
| ·VP3 蛋白无序性的预测 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-52页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·病毒的拯救 | 第47-48页 |
| ·拯救病毒RT-PCR及序列测定 | 第48页 |
| ·拯救病毒的间接免疫荧光 | 第48页 |
| ·拯救病毒的体外复制动力学 | 第48-49页 |
| ·拯救病毒的体内复制动力学 | 第49-50页 |
| ·试验鸡的症状与剖检变化 | 第50-51页 |
| ·试验鸡法氏囊的RT-PCR与序列测定 | 第51页 |
| ·VP3 C端氨基酸序列比对分析 | 第51页 |
| ·VP3 蛋白的无序性 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 鸡传染性法氏囊病病毒基因组A节段3’-UTR影响病毒的复制 | 第54-64页 |
| ·材料与方法 | 第54-57页 |
| ·主要仪器 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54-55页 |
| ·病毒、细胞与质粒 | 第55页 |
| ·SPF鸡 | 第55页 |
| ·引物的设计与合成 | 第55页 |
| ·融合PCR介导的Gx株3’-UTR替换Gt株相应区域 | 第55-56页 |
| ·嵌合株A节段真核表达载体的构建 | 第56页 |
| ·嵌合病毒的拯救 | 第56页 |
| ·拯救病毒RT-PCR与测序鉴定 | 第56页 |
| ·拯救病毒间接免疫荧光鉴定 | 第56页 |
| ·拯救病毒体外复制动力学试验 | 第56-57页 |
| ·拯救病毒体内复制动力学试验 | 第57页 |
| ·试验鸡法氏囊RT-PCR与测序鉴定 | 第57页 |
| ·3’-UTR二级结构预测 | 第57页 |
| ·结果 | 第57-62页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·病毒的拯救 | 第58页 |
| ·拯救病毒RT-PCR及序列测定 | 第58页 |
| ·拯救病毒的间接免疫荧光 | 第58-59页 |
| ·拯救病毒的体外复制动力学 | 第59-60页 |
| ·拯救病毒的体内复制动力学 | 第60页 |
| ·试验鸡法氏囊的RT-PCR及序列测定 | 第60页 |
| ·3’-UTR的二级结构 | 第60-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第五章 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78页 |
