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鹅PIT-1基因的克隆、表达和遗传效应研究

中文摘要第1-12页
ABSTRACT第12-16页
常用词语缩写第16-17页
第一章 文献综述第17-42页
 1 禽类生长性状候选基因研究进展第17-22页
   ·生长激素基因研究进展第18-19页
   ·生长激素受体基因研究进展第19-20页
   ·类胰岛素样生长因子(IGFS)基因研究进展第20-21页
   ·生长素(Ghrelin)基因的研究进展第21-22页
 2 垂体特异性转录因子(PIT-1)及PIT-1 基因研究进展第22-29页
   ·垂体特异性转录因子的发现及命名第22页
   ·垂体特异性转录因子的结构第22-23页
   ·PIT-1 基因的结构第23-24页
   ·PIT-1 基因的表达第24-26页
   ·PIT-1 基因的转录第26页
   ·PIT-1 基因的生物学效应第26-28页
     ·调节胚胎分化和相关细胞系的发育第26-27页
     ·对动物的生长发育的影响第27页
     ·协同作用第27-28页
   ·PIT-1 基因的多态性研究第28-29页
 3 遗传标记辅助选择第29-33页
   ·遗传标记第30-31页
   ·单核苷酸多态性第31-33页
     ·SNPs 的检测方法第31-32页
     ·SNPs 在鹅遗传变异分析中的应用第32-33页
 4 实时荧光定量PCR 分析技术第33-38页
   ·实时荧光定量PCR 的原理第35页
   ·实时荧光定量PCR 的定量方法第35-36页
     ·标准曲线法的相对定量第36页
     ·标准曲线法的绝对定量第36页
     ·比较Ct 法的相对定量第36页
   ·荧光定量PCR 技术的应用第36-38页
 5 生物信息学研究内容与方法第38-39页
 6 本试验选用的6 个群体简介第39-40页
 7 本研究的目的与意义第40-42页
第二章 鹅PIT-1 基因编码区和部分内含子序列的克隆及生物信息学分析第42-69页
 1 引言第42页
 2 试验材料第42页
 3 试剂与仪器第42-44页
   ·主要试剂与仪器第42-43页
   ·主要试剂的配制第43-44页
   ·主要分子生物学软件第44页
 4 试验方法第44-52页
   ·鹅基因组DNA 提取第44-45页
   ·鹅垂体组织总RNA 的提取第45-46页
     ·提取RNA 前的准备工作第45页
     ·Trizol 一步法提取组织总RNA第45-46页
     ·RNA 检测第46页
   ·反转录第46-47页
   ·引物设计第47-48页
   ·目的片段的扩增第48-49页
   ·DNA 片段的克隆测序第49-52页
     ·DNA 片段的回收第49页
     ·感受态细胞的制备(CaCL_2 法)第49-50页
     ·PCR 产物的T 载体连接第50页
     ·转化第50页
     ·碱裂解法质粒DNA 的小规模提取第50-51页
     ·重组质粒的鉴定和测序第51-52页
 5 结果与分析第52-66页
   ·RNA 质量第52页
   ·PCR 和RT-PCR 的扩增结果第52-54页
     ·鹅PIT-1 基因外显子1 和2 的扩增结果第52-53页
     ·鹅PIT-1 基因内含子2 和2a 的扩增结果第53-54页
     ·PIT-1 基因部分编码区RT-PCR 扩增结果第54页
   ·鹅PIT-1 基因编码区的生物信息学分析第54-63页
     ·PIT-1 基因编码区序列拼接及比对结果第54页
     ·鹅PIT-1 基因的编码区序列与其它物种的比较第54-58页
     ·鹅 PIT-1 基因编码区序列的碱基组成第58页
     ·鹅 PIT-1 基因编码区密码子使用分析第58-60页
     ·磷酸化位点预测第60页
     ·疏水性分析第60-61页
     ·蛋白质的跨膜螺旋特征第61-62页
     ·鹅 Pit-1 蛋白质二级结构的预测第62页
     ·鹅 PIT-1 基因保守结构域预测第62-63页
   ·鹅 PIT-1 基因内含子 2 和 2a 序列的测定及同源性分析第63-66页
 6 讨论第66-69页
   ·鹅PIT-1 基因序列的克隆第66-67页
   ·蛋白质结构特性分析第67-68页
   ·保守区域分析第68-69页
第三章 鹅PIT-1 基因的遗传变异及其遗传效应分析第69-94页
 1 引言第69页
 第一节 鹅PIT-1 基因插入/缺失多态性分析及其与生产性能的关联第69-79页
  1 试验材料第69-73页
   ·试验群体第69-70页
   ·主要仪器第70-71页
   ·主要试剂的配制第71页
   ·引物设计及PCR 扩增第71-72页
   ·电泳判型第72页
   ·多态片段的序列测定第72页
   ·数据统计分析第72-73页
    (1) 基因频率、基因型频率在各群体中分布的差异检验第72-73页
    (2) 关联分析第73页
  2 结果与分析第73-79页
   ·鹅PIT-1 基因插入/缺失多态性分析第73-74页
   ·不同基因型序列的比对第74-75页
   ·不同群体基因型分布及等位基因频率第75-76页
   ·鹅PIT-1 基因插入/缺失突变与性状的相关第76-79页
 第二节 鹅PIT-1 基因的SNPS 筛查及其与生产性能相关第79-89页
  1 试验材料第79-80页
   ·试验群体第79页
   ·主要仪器及试剂配制第79页
   ·引物设计第79-80页
  2 试验方法第80-81页
   ·基因组DNA 的提取第80页
   ·PCR 扩增第80页
   ·SSCP 分析第80-81页
   ·多态片段的序列测定第81页
   ·数据统计与分析第81页
     ·相关软件第81页
     ·统计方法第81页
  3 结果与分析第81-89页
   ·鹅PIT-1 基因SNPS 筛查结果第81-85页
   ·鹅PIT-1 基因遗传变异的基因频率及在各群体内的基因型分布第85-87页
   ·鹅PIT-1 基因遗传变异与5 个群体早期体重的相关性分析第87页
   ·鹅PIT-1 基因遗传变异与3 个群体11 周龄屠宰性能的相关性分析第87-89页
 第三节 讨论第89-94页
  1 PIT-1 基因的多态性研究第89-91页
   ·PIT-1 基因内含子1 的多态分析第89-90页
   ·PIT-1 基因单核苷酸多态分析第90-91页
  2 鹅PIT-1 基因与性能的相关第91-94页
第四章 鹅PIT-1 基因、GH 基因和PRL 基因早期表达规律的研究第94-124页
 1 引言第94页
 2 试验材料第94-95页
   ·试验动物第94-95页
   ·主要试剂及仪器第95页
   ·试剂配制第95页
 3 试验方法第95-100页
   ·引物合成第95-96页
   ·组织总RNA 的提取第96页
   ·反转录第96-97页
   ·目的片段的PCR 扩增第97页
   ·扩增片段的回收和克隆测序第97页
   ·重组质粒的提取第97-98页
   ·实时荧光定量PCR第98-99页
   ·统计分析第99-100页
     ·荧光定量计算方法第99-100页
     ·引物扩增效率的计算第100页
 4 结果与分析第100-117页
   ·常规PCR 及测序结果第100-101页
   ·目的基因与内参基因的标准曲线及溶解曲线第101-106页
   ·皖西白鹅PIT-1 基因不同发育阶段的表达规律第106-108页
   ·GH 基因的表达规律第108-114页
     ·皖西白鹅垂体内GH 基因不同发育阶段的变化第108-111页
     ·皖西白鹅下丘脑内GH 基因不同发育阶段的变化第111-114页
   ·PRL 基因的表达规律第114-117页
     ·皖西白鹅母鹅垂体内PRL 基因的发育性变化第114-115页
     ·皖西白鹅母鹅下丘脑内 PRL 基因的发育性变化第115页
     ·皖西白鹅母鹅卵巢内 PRL 基因的发育性变化第115-116页
     ·皖西白鹅母鹅不同组织内 PRL 变化趋势的比较第116-117页
   ·皖西白鹅垂体内 3 种基因的表达变化第117页
 5 讨论第117-124页
   ·相对定量方法第117-119页
   ·PIT-1 基因的表达第119-120页
   ·GH 基因的表达第120-121页
   ·PRL 基因的表达第121-122页
   ·基因的协同表达第122-124页
全文结论第124-126页
参考文献第126-139页
致谢第139-141页
攻读学位期间发表学术论文目录第141-143页

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