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miRNA特异性抑制RhoC基因表达对卵巢癌细胞作用的研究

提要第1-9页
英文缩写词第9-10页
前言第10-13页
第一篇 文献综述第13-27页
 第一章 Rho 亚家族蛋白在恶性肿瘤发生发展中的作用第13-18页
 第二章 RNAi 技术及其在卵巢癌基因治疗中的作用第18-27页
第二篇 实验研究第27-66页
 第一章 RhoC-miRNA 真核表达载体的构建、鉴定及对 RhoC 基因表达的干扰作用的研究第27-47页
   ·材料与方法第27-37页
     ·材料第27-29页
     ·方法第29-37页
       ·RhoC-miRNA 重组质粒的构建第29页
       ·RhoC 发卡miRNA 模板寡核苷酸退火第29-30页
       ·载体与目的片断的连接第30页
       ·扩增重组质粒并进行PCR 鉴定及测序第30-32页
       ·重组质粒纯化第32-33页
       ·细胞培养第33页
       ·用脂质体法转染发卡miRNA 表达载体第33-37页
   ·结果第37-45页
     ·pcDNA~(TM)6.2-GW/Em GFP-miR 载体图第37页
     ·单链DNA oligo 退火形成双链电泳结果第37-38页
     ·重组质粒电泳结果第38-39页
     ·重组质粒PCR 鉴定电泳结果第39页
     ·重组质粒测序结果第39-40页
     ·重组质粒质量与纯度测定结果第40-41页
     ·间接免疫荧光检测重组质粒 pcDNA~(TM)6.2-GW/EmGFP- RhoC-miRNA 在SKOV_3 细胞表达结果第41页
     ·激光共聚焦检测重组质粒转染的卵巢癌细胞的形态学变化(Fig.1.10,1.11 ,1.12)第41-42页
     ·RhoC 的mRNA 在稳定转染细胞中表达的RT-PCR 检测结果第42-43页
     ·Western-blot 法检测细胞内RhoC 蛋白的表达结果第43-45页
   ·讨论第45-47页
 第二章 miRNA 抑制基因RhoC 对卵巢癌细胞生物学功能影响的研究第47-57页
   ·材料与方法第47-50页
     ·材料第47-48页
     ·方法第48-50页
     ·统计学处理第50页
   ·结果第50-57页
     ·RhoC-miRNA 基因对SKOV_3 细胞增殖能力的影响第50-51页
     ·划痕法检测细胞趋向运动能力第51-52页
     ·细胞穿越Matrigel 基质实验检测细胞侵袭能力结果第52-57页
 第三章 靶向RhoC 基因RNA 干扰技术联合紫杉醇对上皮性卵巢癌细胞SKOV_3凋亡的影响第57-66页
   ·材料与方法第57-59页
     ·材料第57-58页
     ·方法第58-59页
     ·统计学处理第59页
   ·结果第59-63页
     ·RhoC-miRNA 转染的卵巢癌SKOV_3 细胞对紫杉醇化疗敏感性的影响第59-61页
     ·流式细胞仪检测基因转染联合紫杉醇处理后细胞凋亡率第61-62页
     ·RT-PCR 法检测SKOV_3 细胞中的凋亡基因Caspase-3、Survivin mRNA 的表达第62-63页
   ·讨论第63-66页
结论第66-67页
参考文献第67-81页
附图第81-89页
攻读学位期间发表的学术论文和科研成果第89-91页
致谢第91-92页
中文摘要第92-95页
Abstract第95-97页

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