| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 温光敏雄性不育小麦穗部发育时期均一化cDNA文库的构建、鉴定和EST分析 | 第13-48页 |
| 1.前言 | 第13-25页 |
| ·小麦温光敏雄性不育的研究进展 | 第13-17页 |
| ·温光敏雄性不育小麦败育机制的细胞学观察研究 | 第14-15页 |
| ·温光敏雄性不育小麦败育机制的生理生化研究 | 第15页 |
| ·温光敏雄性不育小麦败育机制的分子生物学研究 | 第15-17页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第17-23页 |
| ·构建cDNA文库的方法 | 第17-20页 |
| ·经典cDNA文库构建的方法 | 第17页 |
| ·Smart技术构建cDNA文库的方法 | 第17-18页 |
| ·Strategen公司构建cDNA文库的方法 | 第18页 |
| ·Gateway技术构建cDNA文库的方法 | 第18-20页 |
| ·均一化cDNA文库的构建 | 第20-23页 |
| ·复性式均一化技术 | 第21页 |
| ·基因组饱和杂交技术 | 第21-23页 |
| ·植物功能基因组学研究方法 | 第23-25页 |
| ·生物信息学的研究和应用 | 第24页 |
| ·EST技术在功能基因组的研究进展 | 第24-25页 |
| ·本研究的目的意义 | 第25页 |
| 2 实验材料和方法 | 第25-32页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·总RNA抽提与mRNA的分离 | 第26-27页 |
| ·独立cDNA文库的构建 | 第27-29页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第27页 |
| ·cDNA第二链合成和双链cDNA提纯 | 第27-28页 |
| ·attB1接头连接和cDNA片段分级分离 | 第28页 |
| ·重组反应以及转化感受态细胞 | 第28-29页 |
| ·cDNA文库的评价 | 第29页 |
| ·TPGMS小麦穗部发育期均一化cDNA文库的构建 | 第29-32页 |
| ·小麦基因组DNA亲和体系的构建 | 第29-32页 |
| ·混合cDNA文库杂交 | 第31页 |
| ·均一化cDNA文库 | 第31-32页 |
| ·表达序列标签(EST)大规模测序的数据处理和分析 | 第32页 |
| 3 结果 | 第32-42页 |
| ·TPGMS小麦穗部发育期独立cDNA文库和均一化文库的构建 | 第32-34页 |
| ·总RNA和mRNA含量和质量检测 | 第32-34页 |
| ·独立cDNA文库的构建 | 第34页 |
| ·均一化cDNA文库的构建 | 第34页 |
| ·EST序列的产生和组装拼接 | 第34-36页 |
| ·与普通小麦穗部发育相关的EST序列的比较 | 第36页 |
| ·EST的注释和功能分类 | 第36-42页 |
| ·EST的注释 | 第37-38页 |
| ·EST的功能分类 | 第38-39页 |
| ·运用Blast2GO进行的GO功能分类 | 第38页 |
| ·运用InterPro进行的GO功能分类 | 第38页 |
| ·EST的GO功能分类 | 第38-39页 |
| ·与已知功能的冷胁迫相关数据库的基因比对 | 第39-42页 |
| ·EST-SSR标记的开发 | 第42页 |
| 4 讨论 | 第42-48页 |
| ·Gateway技术构建6个独立cDNA文库技术的总体评价 | 第42-43页 |
| ·均一化cDNA文库技术的评价 | 第43-44页 |
| ·EST序列数据分析结果的讨论 | 第44-48页 |
| ·Blast2go和InterProScan软件在进行GO功能分类时的比较 | 第44-45页 |
| ·EST的GO功能分类的讨论 | 第45-46页 |
| ·与CSRD数据库基因比对结果的讨论 | 第46-47页 |
| ·EST-SSR标记的开发 | 第47-48页 |
| 第二章 温光敏雄性不育小麦减数分裂时期细胞骨架荧光标记体系的建立 | 第48-72页 |
| 1 前言 | 第48-55页 |
| ·植物细胞骨架的研究进展 | 第48-53页 |
| ·植物细胞骨架的结构和功能 | 第48-51页 |
| ·微管的结构和功能 | 第49-50页 |
| ·微丝的结构和功能 | 第50-51页 |
| ·细胞骨架结构与植物雄性不育的研究 | 第51-53页 |
| ·细胞骨架荧光标记观察体系的建立 | 第53-55页 |
| ·细胞骨架特异性标记方法的应用 | 第53-54页 |
| ·激光共聚焦显微镜在细胞骨架荧光观察中的应用 | 第54-55页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第55页 |
| 2 实验材料和方法 | 第55-61页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·所需试剂溶液的配制 | 第55-57页 |
| ·微管的间接免疫荧光标记体系 | 第57-61页 |
| ·材料的固定和酶解 | 第57-60页 |
| ·多聚赖氨酸直接粘片法 | 第57-58页 |
| ·低熔点石蜡切片法 | 第58-60页 |
| ·微管的荧光标记 | 第60页 |
| ·标记前的准备 | 第60页 |
| ·微管一抗标记 | 第60页 |
| ·微管二抗标记 | 第60页 |
| ·封片 | 第60-61页 |
| ·微丝免疫荧光标记体系 | 第61页 |
| ·材料的固定和酶解 | 第61页 |
| ·微丝的荧光标记 | 第61页 |
| ·封片 | 第61页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察 | 第61页 |
| 3 结果分析与讨论 | 第61-67页 |
| ·小麦细胞骨架荧光标记体系的建立 | 第61-65页 |
| ·多聚赖氨酸直接粘片法 | 第62-63页 |
| ·采用多聚赖氨酸直接粘片固定微管的标记结果 | 第62页 |
| ·采用多聚赖氨酸直接粘片固定微丝的标记结果 | 第62页 |
| ·针对小麦微管、微丝荧光标记所进行的多聚赖氨酸直接粘片法的改进 | 第62-63页 |
| ·低熔点石蜡切片法 | 第63-64页 |
| ·采用低熔点石蜡切片固定微管的标记结果 | 第63-64页 |
| ·采用低熔点石蜡切片固定微丝的标记结果 | 第64页 |
| ·针对小麦微管、微丝荧光标记所进行的低熔点石蜡切片法的改进 | 第64页 |
| ·微丝、微管荧光标记的最佳荧光标记液稀释比例 | 第64-65页 |
| ·两种小麦细胞骨架荧光标记体系的比较 | 第65-67页 |
| 4 实验展望 | 第67-72页 |
| 参考文献 | 第72-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 附录 | 第84-86页 |
| 附录1 Total RNA Extraction | 第84页 |
| 附录2 Oligotex mRNA Spin-Column Protocol(QIAGEN OligotexMaxi kit,Qiagen,Germany) | 第84-85页 |
| 附录3 Plasmid Mini-Preps | 第85-86页 |
| 附录4 Genomic DNA isolation(CTAB method) | 第86页 |
