中文摘要 | 第1-4页 |
Abstract | 第4-9页 |
英文缩略语表 | 第9-11页 |
前言 | 第11-13页 |
第一章 萜类化合物概述 | 第13-22页 |
1 萜类化合物的特点和功能 | 第13-15页 |
·萜类化合物的特点 | 第13页 |
·萜类化合物的分类及功能 | 第13-15页 |
·单萜 | 第14页 |
·倍半萜及二萜 | 第14-15页 |
·其它的萜类化合物 | 第15页 |
2 萜类化合物生物合成途径研究进展 | 第15-18页 |
·萜类化合物的生物合成途径 | 第15页 |
·MVA途径 | 第15-16页 |
·MEP途径 | 第16-18页 |
·两条合成途径的联系 | 第18页 |
3 萜类化合物生物合成途径关键酶的研究进展 | 第18-22页 |
·HMGR | 第18-19页 |
·DXS | 第19页 |
·DXR | 第19-22页 |
第二章 dxr基因的克隆、表达及DXR的纯化和活性检测 | 第22-37页 |
1 材料与仪器 | 第22-25页 |
·菌株和载体 | 第22-23页 |
·工具酶及试剂 | 第23页 |
·主要溶液配方 | 第23-24页 |
·培养基 | 第24-25页 |
·主要仪器 | 第25页 |
2 方法 | 第25-31页 |
·dxr基因的PCR扩增 | 第25-26页 |
·pET15b-DXR重组质粒的构建 | 第26-28页 |
·PCR产物的胶回收及双酶切反应 | 第26-27页 |
·Top10感受态细胞的制备 | 第27页 |
·目的基因与载体的连接与转化 | 第27-28页 |
·pET15b-DXR的酶切鉴定及测序 | 第28页 |
·BL21(DE3)-pET15b-DXR的构建 | 第28页 |
·重组蛋白的诱导表达及最佳诱导时间优化 | 第28页 |
·DXR融合蛋白的SDS-PAGE分析 | 第28页 |
·DXR融合蛋白的Western-Blotting鉴定 | 第28-29页 |
·DXR融合蛋白的大量诱导表达及蛋白纯化鉴定 | 第29-30页 |
·Bradford法测定DXR融合蛋白浓度 | 第30页 |
·DXP的制备 | 第30-31页 |
·DXR融合蛋白暨DXR的活性检测 | 第31页 |
3.结果与分析 | 第31-35页 |
·PCR扩增目的基因dxr结果 | 第31页 |
·双酶切鉴定结果 | 第31-32页 |
·pET15b-DXR的测序结果 | 第32页 |
·DXR融合蛋白的诱导表达及最佳诱导时间优化结果 | 第32-33页 |
·DXR融合蛋白Western-Blotting鉴定结果 | 第33页 |
·纯化结果 | 第33-34页 |
·DXR浓度测定 | 第34页 |
·DXR活性分析 | 第34-35页 |
4.讨论 | 第35-36页 |
小结一 | 第36-37页 |
第三章 野芝麻中环烯醚萜苷的生物合成研究 | 第37-44页 |
1 材料与方法 | 第38-40页 |
·实验材料 | 第38页 |
·试剂 | 第38-39页 |
·实验方法 | 第39-40页 |
·[3,4,5-~(13)C_3]DXP的合成 | 第39页 |
·植物喂饲实验 | 第39页 |
·环烯醚萜苷的提取分离及~(13)C NMR分析 | 第39-40页 |
2 结果与分析 | 第40-42页 |
3.结论 | 第42-43页 |
小结二 | 第43-44页 |
参考文献 | 第44-50页 |
附录 | 第50-55页 |
1.dxr基因测序图1 | 第50-51页 |
2.dxr基因测序图2 | 第51-52页 |
3.纯品DXP的~1H NMR图谱 | 第52-53页 |
4.Lamalbid的~(13)C NMR数据 | 第53-55页 |
致谢 | 第55页 |