| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| ·紫花苜蓿 | 第13-16页 |
| ·紫花苜蓿植物学特征 | 第13页 |
| ·紫花苜蓿生物学特性 | 第13-14页 |
| ·紫花苜蓿的经济价值 | 第14-16页 |
| ·紫花苜蓿的基因工程研究进展 | 第16页 |
| ·几丁质酶 | 第16-19页 |
| ·几丁质 | 第16-17页 |
| ·植物几丁质酶 | 第17-18页 |
| ·几丁质酶的功能 | 第18-19页 |
| ·几丁质酶在基因工程研究中的进展 | 第19页 |
| ·试验的目的与意义 | 第19-21页 |
| 第二章 紫花苜蓿几丁质酶基因的克隆与序列分析 | 第21-36页 |
| ·试验材料和方法 | 第21-26页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·试验中仪器 | 第21页 |
| ·试验中的溶液与培养基 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21-22页 |
| ·引物合成 | 第22页 |
| ·试验方法 | 第22-26页 |
| ·试验结果与分析 | 第26-35页 |
| ·RNA 提取 | 第26-27页 |
| ·RNA 纯化 | 第27页 |
| ·同源克隆得到紫花苜蓿几丁质酶 ClassⅢ基因 | 第27页 |
| ·目的胶回收 | 第27-28页 |
| ·链接产物的 PCR | 第28页 |
| ·阳性克隆菌液的 PCR | 第28-29页 |
| ·紫花苜蓿几丁质酶 ClassⅢ核酸序列 | 第29-30页 |
| ·紫花苜蓿几丁质酶 ClassⅢ氨基酸序列分析 | 第30-31页 |
| ·MsChiⅢ的亲疏水性分析 | 第31-32页 |
| ·MsChiⅢ的跨膜螺旋信号分析 | 第32页 |
| ·MsChiⅢ的功能位点分析 | 第32-33页 |
| ·MsChiⅢ二级结构分析 | 第33页 |
| ·MsChiⅢ三级结构的分析 | 第33-34页 |
| ·系统发育树的构建 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 植物表达载体的构建 | 第36-47页 |
| ·试验材料和方法 | 第36-41页 |
| ·试验仪器 | 第36页 |
| ·试验试剂 | 第36页 |
| ·溶液和培养基 | 第36-37页 |
| ·引物合成 | 第37页 |
| ·试验方法 | 第37-41页 |
| ·试验结果与分析 | 第41-44页 |
| ·目的基因中酶切位点的引入 | 第41-42页 |
| ·酶切 MschiⅢ-PMD18-T 和 PCAMBIA1302 | 第42-43页 |
| ·连接效果的测定 | 第43页 |
| ·PCR 和酶切鉴定植物表达载体 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-47页 |
| ·ORF 两端酶切位点的引入 | 第44-45页 |
| ·T4 连接酶作用下连接反应 | 第45页 |
| ·PCAMBIA1302 中的报告基因 GFP | 第45-47页 |
| 第四章 农杆菌介导 MsChiⅢ转化烟草与分子检测 | 第47-55页 |
| ·试验材料及方法 | 第47-50页 |
| ·植物材料 | 第47页 |
| ·试验仪器 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·溶液和培养基 | 第47-48页 |
| ·引物合成 | 第48页 |
| ·试验方法 | 第48-50页 |
| ·试验结果与分析 | 第50-53页 |
| ·试验中 Hyg 选择压的确定 | 第50-51页 |
| ·烟草的转化与成苗 | 第51-52页 |
| ·PCR 检测 | 第52页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| ·Hyg 选择压的重要性 | 第53-54页 |
| ·PCR 和 RT-PCR 结果比较 | 第54-55页 |
| 第五章农杆菌介导 MsChiⅢ转化紫花苜蓿与分子检测 | 第55-64页 |
| ·试验材料及方法 | 第55-58页 |
| ·植物材料 | 第55页 |
| ·试验仪器 | 第55页 |
| ·试验试剂 | 第55页 |
| ·溶液及培养基 | 第55-56页 |
| ·引物 | 第56页 |
| ·试验方法 | 第56-58页 |
| ·试验结果与分析 | 第58-62页 |
| ·试验中抗生素选择压的确定 | 第58-59页 |
| ·侵染时间 | 第59-60页 |
| ·共培养时间 | 第60页 |
| ·紫花苜蓿转化和成苗过程 | 第60-61页 |
| ·PCR 检测 | 第61-62页 |
| ·RT-PCR 检测结果 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第六章 结论与展望 | 第64-65页 |
| ·主要结论 | 第64页 |
| ·展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 附录 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简历 | 第74页 |
