| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 绪论 | 第11-31页 |
| ·植物抗病的分子机理 | 第11-17页 |
| ·植物抗病基因 | 第17-19页 |
| ·抗病基因的克隆方法 | 第19-22页 |
| ·植物cDNA文库的构建研究进展 | 第22-29页 |
| ·cDNA文库构建方法的进展 | 第23-27页 |
| ·cDNA文库应用于分离新基因的方法 | 第27-29页 |
| ·研究的目的、意义和研究内容 | 第29-31页 |
| 2 松材线虫病诱导马尾松抑制消减文库的构建 | 第31-49页 |
| ·材料、试剂、与设备 | 第31-33页 |
| ·材料与处理 | 第31页 |
| ·酶与试剂 | 第31-32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-39页 |
| ·RNA提取与mRNA纯化 | 第33-34页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第34页 |
| ·dscDNA的扩增 | 第34-35页 |
| ·cDNA的Rsa Ⅰ酶切及纯化 | 第35-36页 |
| ·Tester cDNA加接头 | 第36页 |
| ·抑制性消减杂交 | 第36-37页 |
| ·抑制性消减杂交文库的扩增 | 第37-38页 |
| ·PCR产物的纯化、连接载体及转化 | 第38页 |
| ·插入片段的检测 | 第38-39页 |
| ·测序与分析 | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-46页 |
| ·马尾松总RNA的提取 | 第39-40页 |
| ·cDNA的扩增的检测 | 第40-41页 |
| ·cDNA的酶切及接头连接检测 | 第41页 |
| ·SSH文库消减效率检测 | 第41-42页 |
| ·插入片段的检测 | 第42页 |
| ·SSH文库差异表达克隆的序列分析 | 第42-46页 |
| ·讨论 | 第46-49页 |
| 3 苯丙氨酸解氨酶基因克隆 | 第49-63页 |
| ·材料与试剂 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-53页 |
| ·引物合成 | 第49-50页 |
| ·总RNA的提取 | 第50页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第50页 |
| ·5'和3'RACE cDNA的合成 | 第50-51页 |
| ·核心序列的克隆与RACE扩增 | 第51-52页 |
| ·PCR产物的电泳检测、胶回收、载体连接、细菌转化及测序 | 第52-53页 |
| ·序列和生物信息学分析 | 第53页 |
| ·结果与分析 | 第53-60页 |
| ·总RNA纯度和完整性检测 | 第53页 |
| ·核心序列的获得及3'末端和5'末端的获得 | 第53-55页 |
| ·cDNA全长获得与分析 | 第55-57页 |
| ·马尾松苯丙氨酸解氨酶氨基酸的序列分析 | 第57-59页 |
| ·系统发育树的构建 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-63页 |
| 4 亲环素基因克隆与原核表达 | 第63-75页 |
| ·材料与试剂 | 第63-64页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63-64页 |
| ·方法 | 第64-67页 |
| ·引物设计与合成 | 第64页 |
| ·马尾松总RNA提取与cDNA合成 | 第64页 |
| ·亲环素基因克隆与测序 | 第64-65页 |
| ·序列的拼接与生物信息学分析 | 第65页 |
| ·表达载体的构建 | 第65-66页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第66-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-74页 |
| ·亲环素基因的扩增、克隆及鉴定 | 第67-70页 |
| ·马尾松亲环素基因的氨基酸序列特征 | 第70-71页 |
| ·与其他物种的CyPs同源性分析 | 第71-73页 |
| ·pET-cab-pm1基因重组表达载体的检测与原核表达 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-75页 |
| 5 马尾松捕光叶绿素a/b结合蛋白基因克隆与原核表达 | 第75-87页 |
| ·材料与试剂 | 第75-76页 |
| ·材料 | 第75页 |
| ·主要试剂 | 第75-76页 |
| ·方法 | 第76-79页 |
| ·引物设计与合成 | 第76页 |
| ·马尾松总RNA提取与cDNA合成 | 第76页 |
| ·叶绿素捕光蛋白基因克隆与测序 | 第76-77页 |
| ·序列的拼接与生物信息学分析 | 第77页 |
| ·表达载体的构建及目的蛋白的诱导表达 | 第77-79页 |
| ·结果与分析 | 第79-84页 |
| ·基因的克隆与分析 | 第79-80页 |
| ·马尾松cab基因的氨基酸序列分析 | 第80-81页 |
| ·与其他物种的cab基因比对分析 | 第81-83页 |
| ·pET-cab-Pm1基因重组表达载体的检测与原核表达 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-87页 |
| 6 结论与创新 | 第87-89页 |
| ·结论 | 第87页 |
| ·本文工作创新之处 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-105页 |
| 附录A 攻读学位期间发表和接收的论文 | 第105-106页 |
| 附录B 攻读学位期间参与和主持项目课题 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
