| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 缩略词表与术语 | 第11-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-46页 |
| 1.1 鞘糖脂简介 | 第17-20页 |
| 1.1.1 鞘糖脂的结构及生理功能 | 第17-20页 |
| 1.1.2 鞘糖脂种类的多样性 | 第20页 |
| 1.2 药用鞘糖脂 | 第20-22页 |
| 1.2.1 神经节苷脂GM | 第20-21页 |
| 1.2.2 癌症相关的鞘糖脂疫苗 | 第21-22页 |
| 1.3 鞘糖脂的制备方法 | 第22-23页 |
| 1.3.1 鞘糖脂的天然提取 | 第22-23页 |
| 1.3.2 鞘糖脂的化学法合成 | 第23页 |
| 1.4 鞘糖脂的人工生物合成体系 | 第23-33页 |
| 1.4.1 合成生物学 | 第23-24页 |
| 1.4.2 鞘糖脂的人工生物合成研究进展 | 第24-33页 |
| 1.5 鞘糖脂内切糖苷酶 | 第33-39页 |
| 1.5.1 鞘糖脂内切糖苷酶简介 | 第33-36页 |
| 1.5.2 鞘糖脂内切糖苷酶的应用 | 第36页 |
| 1.5.3 鞘糖脂内切糖苷酶改造为糖苷合成酶的研究进展 | 第36-39页 |
| 1.6 鞘糖脂N-去酰基化酶 | 第39-40页 |
| 1.6.1 鞘糖脂N-去酰基化酶简介 | 第39页 |
| 1.6.2 鞘糖脂N-去酰基化酶的应用 | 第39-40页 |
| 1.6.3 鞘糖脂N-去酰基化酶的研究现状 | 第40页 |
| 1.7 岩藻糖基转移酶 | 第40-44页 |
| 1.7.1 岩藻糖基化简介 | 第40-41页 |
| 1.7.2 岩藻糖基转移酶简介 | 第41-42页 |
| 1.7.3 岩藻糖基转移酶的应用 | 第42-43页 |
| 1.7.4 糖基转移酶的高通量筛选方法 | 第43-44页 |
| 1.8 本课题的研究意义 | 第44-46页 |
| 第二章 鞘糖脂内切糖苷酶EGCase I的结构及功能研究 | 第46-76页 |
| 2.1 引言 | 第46-47页 |
| 2.2 材料与方法 | 第47-54页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第47-49页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第49-54页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第54-74页 |
| 2.3.1 鞘糖脂内切糖苷酶的进化分析 | 第54-55页 |
| 2.3.2 103 S_EGCase I克隆、表达和纯化 | 第55-58页 |
| 2.3.3 103 S_EGCase I的底物特异性研究 | 第58-60页 |
| 2.3.4 103 S_EGCase I的酶催化动力学研究 | 第60-61页 |
| 2.3.5 EGCase I的晶体结构解析 | 第61-68页 |
| 2.3.6 EGCase II的理性设计 | 第68-71页 |
| 2.3.7 EGCase底物特异性探究 | 第71-73页 |
| 2.3.8 103 S_EGCase I的合成活性研究 | 第73-74页 |
| 2.4 本章小结 | 第74-76页 |
| 第三章 鞘糖脂N-去酰基化酶SA_SCD的酶学性质表征及应用 | 第76-103页 |
| 3.1 引言 | 第76-77页 |
| 3.2 材料与方法 | 第77-81页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第77-78页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第78-81页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第81-102页 |
| 3.3.1 SA_SCD测活方法建立 | 第81-84页 |
| 3.3.2 SA_SCD酶学性质表征 | 第84-90页 |
| 3.3.3 SA_SCD与 PS_SCD的酶反应动力学比较 | 第90-94页 |
| 3.3.4 SA_SCD与 PS_SCD对鞘糖脂极性头特异性比较 | 第94-98页 |
| 3.3.5 SA_SCD在鞘糖脂脂肪酸模块重构中的应用 | 第98-102页 |
| 3.4 本章小结 | 第102-103页 |
| 第四章 岩藻糖基转移酶FutA的定向进化 | 第103-141页 |
| 4.1 引言 | 第103-104页 |
| 4.2 材料与方法 | 第104-113页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第104-105页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第105-113页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第113-139页 |
| 4.3.1 FutA高通量筛选方法的建立及优化 | 第113-122页 |
| 4.3.2 基于PCR的阳性基因回收方法的建立 | 第122-124页 |
| 4.3.3 正/负模式筛选 | 第124页 |
| 4.3.4 定量模式筛选 | 第124-130页 |
| 4.3.5 FutA随机突变库的建立与筛选 | 第130-132页 |
| 4.3.6 FutA的 DNA-shuffling突变库的建立与筛选 | 第132-135页 |
| 4.3.7 FutA突变体的构建,表达,纯化与活力测定 | 第135-137页 |
| 4.3.8 高通量筛选体系在α1,2-岩藻糖基转移酶筛选中的应用探索 | 第137-139页 |
| 4.4 本章小结 | 第139-141页 |
| 第五章 总结与展望 | 第141-144页 |
| 5.1 主要结论 | 第141-142页 |
| 5.2 创新点 | 第142页 |
| 5.3 研究展望 | 第142-144页 |
| 参考文献 | 第144-159页 |
| 附录1 质谱数据 | 第159-160页 |
| 攻读博士学位期间的研究成果 | 第160-161页 |
| 攻读博士学位期间参与的科研项目 | 第161-162页 |
| 致谢 | 第162-163页 |
