| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 符号说明 | 第12-14页 |
| 第一章 无脊椎动物先天免疫与模式识别受体 | 第14-27页 |
| 一、无脊椎动物先天免疫简介 | 第14-16页 |
| 1. 细胞免疫 | 第14页 |
| 2. 体液免疫 | 第14-16页 |
| ·血淋巴凝集 | 第15页 |
| ·酚氧化酶原系统的激活 | 第15页 |
| ·抗菌肽的产生 | 第15-16页 |
| 二、模式识别蛋白(PRRs) | 第16-27页 |
| 1. 肽聚糖识别蛋白(PGRPs) | 第16-18页 |
| 2. Toll样受体(TLRs) | 第18-19页 |
| 3. 革兰氏阴性菌结合蛋白(GNBPs) | 第19-20页 |
| 4. 清道夫受体(SCRs) | 第20-21页 |
| 5. 含硫脂键蛋白(TEP) | 第21-22页 |
| 6. 唐氏综合症细胞粘附分子(DSCAM) | 第22-23页 |
| 7. 半乳糖苷结合凝集素(Galectins) | 第23-24页 |
| 8. 纤维蛋白原样结构域免疫凝集素(FBGLs) | 第24-26页 |
| 9. C-型凝集素(CTLs) | 第26-27页 |
| 第二章 C-型凝集素的结构与功能多样性 | 第27-40页 |
| 一、引言 | 第27-28页 |
| 二、C-型凝集素的定义及特征 | 第28-29页 |
| 三、C-型凝集素的结构 | 第29-30页 |
| 四、C-型凝集素的种类多样性 | 第30-34页 |
| 五、C-型凝集素的功能 | 第34-38页 |
| 1. 哺乳动物C-型凝集素的功能 | 第34-35页 |
| 2. 无脊椎动物中C-型凝集素的功能 | 第35-38页 |
| 六、本论文的研究目的和技术路线 | 第38-40页 |
| 第三章 中国明对虾Fc-Lec2的两个结构域协同参与先天免疫应答 | 第40-67页 |
| 一、前言 | 第40-41页 |
| 二、材料和方法 | 第41-54页 |
| 1. 菌株和载体 | 第41页 |
| 2. 仪器和试剂 | 第41-42页 |
| 3. 实验材料 | 第42页 |
| 4. 总mRNA的提取和cDNA的合成 | 第42-44页 |
| ·总mRNA的提取 | 第43页 |
| ·合成cDNA | 第43-44页 |
| 5. 中国明对虾Fc-Lec2基因的扩增 | 第44-46页 |
| ·PCR扩增 | 第44页 |
| ·胶回收 | 第44页 |
| ·连接 | 第44-45页 |
| ·转化 | 第45页 |
| ·筛选 | 第45页 |
| ·提取阳性克隆重组质粒 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的PCR和双酶切验证 | 第46页 |
| 6. 序列分析 | 第46页 |
| 7. 组织分布和刺激后表达模式分析 | 第46-47页 |
| 8. 蛋白重组表达,纯化及抗体制备 | 第47-50页 |
| ·构建重组质粒和转化表达菌株 | 第47-48页 |
| ·蛋白试表达 | 第48页 |
| ·检测重组表达的蛋白是否形成包涵体 | 第48页 |
| ·蛋白大规模表达 | 第48页 |
| ·包涵体变性复性 | 第48-49页 |
| ·蛋白的亲和纯化 | 第49页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第49-50页 |
| 9. Western blot法检测重组蛋白 | 第50页 |
| 10. Western blot法检测组织分布 | 第50-51页 |
| 11. 免疫组织化学法定位蛋白分布 | 第51页 |
| ·载玻片清洗 | 第51页 |
| ·切片与贴片 | 第51页 |
| ·抗体反应 | 第51页 |
| 12. 细菌结合 | 第51-52页 |
| ·细菌结合实验 | 第52页 |
| ·糖抑制细菌结合实验 | 第52页 |
| 13. 凝集实验 | 第52-53页 |
| ·兔血细胞凝集实验 | 第52-53页 |
| ·细菌凝集实验 | 第53页 |
| 14. 糖的抑制凝集作用实验 | 第53页 |
| 15. 蛋白与糖的直接结合实验 | 第53-54页 |
| 三、结果 | 第54-64页 |
| 1. 基因克隆和序列分析 | 第54-56页 |
| 2. Fc-Lec2的组织分布和表达模式 | 第56-58页 |
| 3. Fc-Lec2与结构域的重组表达及纯化 | 第58-59页 |
| 4. 对虾体内Fc-Lec2的蛋白表达 | 第59-60页 |
| 5. Fc-Lec2的细菌结合活性 | 第60-61页 |
| 6. Fc-Lec2的细菌凝集活性 | 第61-62页 |
| 7. Fc-Lec2的糖特异性 | 第62-64页 |
| 四、讨论 | 第64-67页 |
| 第四章 克氏原螯虾C-型凝集素PcLec1参与细胞免疫反应 | 第67-84页 |
| 一、前言 | 第67页 |
| 二、材料和方法 | 第67-71页 |
| 1. 菌株和载体 | 第67页 |
| 2. 仪器和试剂 | 第67页 |
| 3. 实验材料 | 第67-68页 |
| 4. 总mRNA的提取和cDNA的合成 | 第68页 |
| 5. 克氏原螯虾PcLec1基因的扩增 | 第68页 |
| 6. 序列分析 | 第68页 |
| 7. mRNA组织分布和刺激后表达模式 | 第68-69页 |
| 8. 蛋白重组表达,纯化及抗体制备 | 第69页 |
| 9. Western blot法检测组织分布 | 第69页 |
| 10. 细菌凝集 | 第69页 |
| 11. 细菌结合 | 第69页 |
| 12. 蛋白与糖的直接结合实验 | 第69-70页 |
| 13. 体外促进血细胞包被实验 | 第70页 |
| ·偶联PcLec1到凝胶小珠 | 第70页 |
| ·检测偶联 | 第70页 |
| ·血细胞对小珠的包被 | 第70页 |
| 14. 体内清除实验 | 第70-71页 |
| 三、结果 | 第71-80页 |
| 1. 克隆并得到PcLec1的cDNA全长 | 第71-72页 |
| 2. PcLec1的序列分析 | 第72-74页 |
| 3. PcLec1表达模式 | 第74-75页 |
| 4. 重组PcLec1蛋白的表达与纯化 | 第75-76页 |
| 5. 蛋白免疫印迹法检测在螯虾不同组织中PcLec1蛋白的表达水平 | 第76-77页 |
| 6. 重组PcLec1蛋白的细菌结合实验与细菌凝集实验 | 第77页 |
| 7. 重组PcLec1蛋白的糖结合曲线 | 第77-79页 |
| 8. 重组PcLec1蛋白可促进血细胞的包被(Encapsulation) | 第79-80页 |
| 9. 重组PcLec1蛋白参与细菌清除作用 | 第80页 |
| 四、讨论 | 第80-84页 |
| 第五章 克氏原螯虾一种含有IG结构域的C-型凝集素可促进螯虾血细胞对细菌的吞噬作用 | 第84-106页 |
| 一、前言 | 第84-85页 |
| 二. 材料与方法 | 第85-91页 |
| 1. 化学试剂及病原菌菌株 | 第85-86页 |
| 2. 实验动物的刺激与样品收集 | 第86页 |
| 3. cDNA序列的克隆 | 第86页 |
| 4. 序列分析 | 第86-87页 |
| 5. 实时荧光定量PCR | 第87页 |
| 6. PcLec3的全长和两个结构域的重组表达及纯化 | 第87-88页 |
| 7. 蛋白免疫印记 | 第88页 |
| 8. 细菌结合实验 | 第88-89页 |
| 9. 重组PcLec3蛋白的多糖结合实验 | 第89页 |
| 10. 免疫组织化学法检测鳗弧菌刺激后的螯虾血细胞 | 第89-90页 |
| 11. PcLec3及其结构域的细胞粘附实验 | 第90页 |
| 12. 体内病原吞噬实验 | 第90-91页 |
| 三、结果 | 第91-103页 |
| 1. 克隆得到PcLec3的cDNA全长 | 第91-92页 |
| 2. PcLec3的序列分析结果 | 第92-93页 |
| 3. PcLec3 mRNA的组织分布和表达模式 | 第93-95页 |
| 4. PcLec3蛋白的重组表达和纯化 | 第95页 |
| 5. PcLec3蛋白的组织分布 | 第95-98页 |
| 7. 重组PcLec3的多糖结合实验 | 第98-100页 |
| 8. 重组PcLec3的细胞粘附活性实验 | 第100-101页 |
| 9. 重组PcLec3具有促进血细胞吞噬作用的能力 | 第101-103页 |
| 四、讨论 | 第103-106页 |
| 创新点总结 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 已发表文章 | 第120-121页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第121-122页 |
| 附录 | 第122-150页 |
